ሕጂ†ናይ ሕጂ ኣድራሻ፡ OX11 0DE፡ ዓባይ ብሪጣንያ፡ ህንጻ ኣልማዝ፡ ሃርዌል ሳይንስን ምህዞን ፓርክ፡ ዳይትኮት፡ ኦክስፎርድሻየር፡ ዓባይ ብሪጣንያ፡ ዳይመንድ ላይት ሶርስ ኮ.፡ ሊሚተድ፡ ኤሌክትሮኒካዊ ባዮሎጂካዊ ምስሊ ማእከል።
እቲ ማእከል ምላሽ ብርሃን-ምእካብ ኮምፕለክስ 1 (RC-LH1) ቀንዲ ፎቶሲንተቲክ ባእታ ናይ ሐምላይ ፎቶትሮፊክ ባክተርያ እዩ። ክልተ ክራይዮ-ኤሌክትሮን ማይክሮስኮፒ ኣቃውማታት ናይቲ RC-LH1 ኮምፕለክስ ካብ ሮዶፕስዩዶሞናስ ፓሉስትሪስ ኣተኣታትና። እቲ 2.65-Å ርዝነት ዘለዎ ኣቃውማ ናይቲ RC-LH114-W ኮምፕለክስ ንRC ዝኸበቡ 14 ንኡሳን ኣሃዱ LH1 ሉፕስ ዝሓዘ ኮይኑ፡ እዚ ድማ ብፕሮቲን W ዝቋረጽ ክኸውን ከሎ፡ እቲ ፕሮቲን-W ዘይብሉ ኮምፕለክስ ድማ ምሉእ ብምሉእ ብRC ዝተኸበበ RC ውህደት እዩ። ዕጹው 16 ንኡስ ኣሃዱ LH1 ሉፕ። ምውድዳር ናይዞም ኣቃውማታት ኣብ RC-LH1 ኮምፕለክስ ንዘሎ ዳይናሚክስ ኲኖን ርድኢት ይህብ፣ እዚ ድማ ቅድሚ ሕጂ ኣብ RC QB ቦታ ኲኖን ኣብ ዝእስረሉ እዋን ዘይተወሰነ ቅርጻዊ ለውጢ ሓዊሱ፣ ከምኡ’ውን ኣቀማምጣ ሓገዝቲ ኪኖን መእሰሪ ቦታታት፣ እዚ ድማ ናብ RC ንምሕላፍ ይሕግዝ። እቲ ፍሉይ ኣቃውማ ናይቲ W ፕሮቲን ንLH1 ሉፕ ምዕጻው ይከላኸል፣ በዚ ድማ ነቲ ናይ ኲኖን/ኲኖሎን ምልውዋጥ ንምቅልጣፍ ዝሕግዝ መስመር ይፈጥር።
እቲ ብፎቶሲንተሲስ ዚቐርብ ጸዓት ዳርጋ ንዅሉ ኣብ ምድሪ ዚርከብ ህይወት ኪቕጽል ይኽእል እዩ፣ ንጸሓያዊ ባዮቴክኖሎጂ እውን ዓብዪ ተኽእሎ ኣለዎ። ዓለማዊ ፎቶሲንተሲስ ኣብ ዘስፋሕፍሑሉ እዋን፡ ሐምላይ ፎቶትሮፊክ ባክተርያ ዝተፈላለየ ናይ ጸዓት ሞድን ናይ ምትሕልላፍ ዓቕምን እውን የርእዩ። ካብ ፎቶሲንተሲስ ክቑጠቡን ኣብ ጸልማት ከም ሄተሮትሮፊክ ባክተርያ ክዓብዩን ይኽእሉ፣ ናይትሮጅንን ካርቦን ዳይኦክሳይድን ከዐርዩ ይኽእሉ፣ ሃይድሮጅን ከፍርዩን ሽታ ዘለዎም ውህደታት ከበላሽዉን ይኽእሉ (1-3)። ነዞም መስርሓት ጸዓት ንምሃብ ብርሃን ብቕልጡፍን ብብቕዓትን ናብ ኬሚካላዊ ጸዓት ክቕየር ኣለዎ። እዚ መስርሕ ዝጅምር እቲ ብርሃን ዝዓግት ኣንቴና ኮምፕለክስ ብርሃን ብምምጣጥን ነቲ ዝተዓጽወ ጸዓት ናብ ማእከል ምላሽ (RC) ምስ ዘሰጋግርን እዩ፣ በዚ ድማ ምፍላይ ቻርጅ ይጅምር (4 – 7)። መሰረታዊ ኣሃዱ ፎቶሲንተሲስ ኣብ ሐምላይ ፎቶትሮፊክ ባክተርያ ብዓይነት 2 RC ዝቖመ ኮይኑ፡ ብብርሃን-ምእካብ ኮምፕለክስ 1 (LH1) ተኸቢቡ፡ RC-LH1 ኮር ኮምፕለክስ ይፈጥር። LH1 ብስርርዕ ቁልቁል ዝኣፉ αβ ሄተሮዳይመርስ ዝፍጠር ኮይኑ፡ ነፍሲ ወከፎም ክልተ ባክተርያዊ ክሎሮፊል (BChl) a ሞለኪዩላትን ሓደ ወይ ክልተ ካሮቲኖይድን ይኣስሩ (8-12)። እቲ ዝቐለለ LH1 ኣንቴና ብ16 ወይ 17 αβ heterodimers ዝቖመ ኮይኑ ኣብ ዕጹው ሉፕ ንRC (9-13) ዝኸበበ ኮይኑ፡ ኣብ ካልኦት ቀንዲ ውህደታት ግን፡ ትራንስሜምብሬን ፔፕታይድስ ቀጻልነት ናይቲ ኣብ ከባቢኡ ዘሎ LH1 የቋርጽ , በዚ ድማ ኣብ መንጎ RCን ሳይቶክሮም bc1 ውህደትን ዝርገሐ quinol/quinone የስፋሕፍሕ (11, 13-15) ዝብል ጽሑፍ ኣሎ። ሐምላይ ፎቶትሮፊክ ተኽሊ ሮዶፕስዩዶሞናስ (Rps.) ንፎቶሲንተሲስ ዝድግፍ ምትሕልላፍ ጸዓትን ኤሌክትሮንን ክርዳእ ዝኽእል ሞዴል ፍጡር እዩ። ቀዳማይ ክሪስታላዊ ኣቃውማ Rps. ሞዴል ናይቲ ፓሉስትሪስ RC-LH1 ኮምፕለክስ RC ኮይኑ፡ ብ15 ሄተሮዳይመሪክ LH1 ሉፕስ ዝተኸበበ ኮይኑ፡ ብዘይተፈልጠ ፕሮቲን “ፕሮቲን ደብሊው” (14) ዝተቛረጸ እዩ። ብድሕሪኡ ፕሮቲን-W RPA4402 ተባሂሉ ተለልዩ፣ እዚ ድማ ሰለስተ ዝተገመቱ ትራንስሜምብሬን ሄሊክስ (TMH) ዘለዎ መለለዪ ዘይብሉ 10.5kDa ፕሮቲን እዩ (16)። ንሕና ን RC-L, M (pufL, pufM) ከምኡ’ውን LH1α, β (pufA, pufB) ንኡሳን ኣሃዱታት ዝሕብሩ ጂናት ዝጥቀሙሉ ኣጸዋውዓ ንኽሰማማዕ ነቲ ፕሮቲን W ዝሕብር rpa4402 ጂን ናብ pufW ክንቅይሮ ሓሳብ ኣቕሪብና። እቲ ዝገርም ፕሮቲን-W ኣብ ኣስታት 10% RC-LH1 ጥራይ እዩ ዝርከብ፡ እዚ ድማ Rps የቃልዕ። palustris ክልተ ዝተፈላለዩ RC-LH1 complexes የፍሪ። ኣብዚ፡ ንሕና ልዑል ርዝነት ዘለዎም cryo-EM (cryo-EM) ኣቃውማታት ክልተ ቀንዲ ውህደታት፡ እቲ ሓደ ምስ ፕሮቲን Wን 14 αβ ሄተሮዳይመርን፡ እቲ ካልኣይ ብዘይ ፕሮቲን Wን ዕጹው 16 Heterodimer LH1 ሉፕን ንሕብር። ኣቃውማና ኣብ ርድኢት RC-LH1 complex ናይ Rps ስጉምቲ ለውጢ ይውክል። palustris, ምኽንያቱ ንሕና ናይ ነፍሲ ወከፍ ፍልልይ ሓደ ዓይነት ህዝቢ ተንቲንናዮን ንነፍሲ ​​ወከፍ ፔፕታይድን ዝተኣስሩ ቀለምን ተዛመድቲ ሽኮርን ኲኖንን ብንጹር ንምምዳብ እኹል ውሳነ ኣለና። ናይዞም ኣቃውማታት ብምንጽጻር፡ እቶም ክሳብ ሕጂ ኣብ ዝኾነ ካልእ RC-LH1 ኮምፕለክስ ዘይተረኽቡ ሰለስተ TMH ፕሮቲናት-W፡ ነቲ ናይ ኲኖን/ኲኖሎን ምልውዋጥ ንምቅልጣፍ፡ ኲኖን ቻነል ከም ዝፈጥሩ ይሕብር። ብርክት ዝበሉ ዝተዓቀቡ። ርኽበታትና ኣብ ቅልጣፈ ምትእስሳርን ምልውዋጥን ኲኖን/ኲኖሎን ኣብ RC-LH1 ኮር ኮምፕለክስ ሐምላይ ፎቶትሮፊክ ባክተርያ ሓድሽ ርድኢት ይህብ።
ዝርዝር መጽናዕቲ ናይቶም ኣብ Rps ዝተረኽቡ ክልተ ኮምፕለክሳት ንምምችቻው። palustris, ነፍሲ ወከፍ RC-LH1 ብባዮኬሚካላዊ ኣገባብ ንነጽሎ። እቲ ፕሮቲን W-ጉድለት ዘለዎ ኮምፕለክስ (ካብዚ ንደሓር ΔpufW ተባሂሉ ዝጽዋዕ) ካብቲ pufW ጂን ዝጎደሎ ጽግዕተኛ (16) ተጸሪጉ፣ ሓደ RC-LH1 ኮምፕለክስ ጥራይ እዩ ክፍጠር ዝኽእል። እቲ ፕሮቲን W ዝሓዘ ውህደት ብሓደ ጽግዕተኛ እዩ ዝፍጠር። ናይዚ ጽላት ፕሮቲን W ኣብ C-terminus ብ10x His tag ይቕየር፣ ስለዚ እቲ ፕሮቲን W ዝሓዘ ኮምፕለክስ ምስ መብዛሕትኡ ዝጎደሎ ፕሮቲን W ብውጽኢታዊ መንገዲ ብረት ብዘይምንቅስቓስ ክውሃሃድ ይኽእል። እቲ ኮምፕለክስ ብኣድማዒ መንገዲ ይፍለ (16) ኣፊኒቲ ክሮማቶግራፊ (IMAC)።
ከምቲ ኣብ ስእሊ 1 ንርእዮ ዘለና ክልቲኦም ውህደታት ብLH1 ኣንቴና ዝተኸበቡ ሰለስተ ንኡሳን ኣሃዱታት RC (RC-L, RC-M and RC-H) ዝሓዙ እዮም። እቲ 2.80-A ኣቃውማ ናይቲ ፕሮቲን-W ዝጎደሎ ውህደት 16 αβ heterodimers የርኢ፣ ምሉእ ብምሉእ ንRC ዝኸበበ ዕጹው LH1 ሉፕ ይፈጥር፣ ካብዚ ንደሓር RC-LH116 complex ተባሂሉ ይጽዋዕ። እቲ 2.65Å ኣቃውማ ናይቲ ፕሮቲን-W ዝሓዘ ውህደት ብፕሮቲን-W ዝተቛረጸ 14-ሄተሮዳይመር LH1 ኣለዎ፡ ካብዚ ንደሓር RC-LH114-W ተባሂሉ ይጽዋዕ።
(ሀን ለን) ውክልና ገጽ ናይቲ ውሁድ። (C and D) ብበትሪ ዝግለጹ ዝተኣሳሰሩ ቀለም። (E and F) ካብ ሳይቶፕላዝማዊ ገጽ ዝተዓዘብናዮም ውህደታት ኣብ ካርቱን ዝተወከሉ ፔፕታይድስን LH1 ንኡሳን ኣሃዱታትን ኣለዎም፣ ካብቲ ፕሮቲን-W ክፍተት ድማ ብኣንፈት ሰዓት ቁጽሪ ይወሃቦም [ምስ Rba ቁጽሪ ዝሰማማዕ። ስፋሮይድስ ኮምፕለክስ (13)]። ንLH1-α ሕብሪ ናይቲ ፕሮቲን ንኡስ ኣሃዱ ብጫ እዩ፤ ንLH1-β ሕብሪ ናይቲ ፕሮቲን ንኡስ ኣሃዱ ሰማያዊ እዩ፤ ንፕሮቲን-W፡ እቲ ፕሮቲን ቀይሕ እዩ፤ ንRC-H ድማ ሳይን እዩ፤ ንRC-L ድማ ኣራንሺ እዩ፤ ን RC-M፡ ማጀንታ። ኮፋክተራት ብበትሪ፣ ቀጠልያ ንBChlን BPh aን ሞለኪዩላት፣ ሐምላይ ንካሮቲኖይድ፣ ብጫ ድማ ንUQ10 ሞለኪዩላት ይውክል። (G and H) ኣብቲ ተመጣጣኒ ዞባ RC-LH114-W complex (G)ን RC-LH116 complex (H)ን ዘሎ ናይ ፕሮቲን-W ክፍተት ብዓባይ ትርኢት። ኮፋክተራት ብመልክዕ ምምላእ ቦታ ይረኣዩ፣ ቺለተድ ኲኖን ብሰማያዊ ይርአ። እቲ ናይ ፕሮቲን-W ክፍተት ብሰማያዊ ስርዝ ድልዝ ዝበለ መስመር ኣብ (G) ይድመጽ፣ እቶም ንኣሽቱ ቀዳዳት ድማ ኣብ ቀለቤት LH116 ኲኖን/ኲኖሎል ዝዝርግሓሎም ብጸሊም ስርዝ ድልዝ ዝበለ መስመር ኣብ (H) ተደሚሮም ኣለዉ።
ስእሊ 1 (A and B) ብክፉት ወይ ዕጹው ስርርዕ LH1αβ heterodimers ዝተኸበበ RC ዘርኢ ኮይኑ ነፍሲ ወከፎም ክልተ BChlን ሓደ ካሮቲኖይድን ይኣስሩ (ስእሊ 1, C and D)። ቅድሚ ሕጂ ዝተገበሩ መጽናዕትታት ከም ዘመልክትዎ፡ Rps እቲ LH1 complex እዩ። ኣብ ባዮሲንተቲክ መንገዲ ስፒሩሊና ዛንቲን፡ እዞም ዓይነታት ዝተሓዋወሰ ህዝቢ ካሮቲኖይድ ዝሓዙ እዮም (17)። ይኹን እምበር ስፓይሮፒሮክሳንቲን እቲ ዓብላሊ ካሮቲኖይድ ኮይኑ ፅዕነቱ ድማ ዘዕግብ እዩ። ስለዚ ኣብ ኩሎም LH1 መእሰሪ ቦታታት ስፒሮክሳንቲን ሞዴል ክንገብር መሪጽና። ኣልፋን ቤታን ፖሊፔፕታይድስ ንጽል TMHs ኮይኖም ሓጸርቲ ሽፋን ደጋዊ ዞባታት ኣለዎም (ስእሊ 1, A, B, E, F)። ዋላ እኳ ጽቕጥቕጥ 17 ተረፍ መረፍ ኣብ C-terminus እንተዘይተራእየ፡ እቲ ኣልፋ ፖሊፔፕታይድ ካብ Met1 ናብ Ala46 ኣብ ክልቲኡ ውህደታት ተበታቲኑ። β ፖሊፔፕታይድ ኣብ RC-LH116 ካብ Gly4 ናብ Tyr52፡ ኣብ RC-LH114-W ድማ ካብ Ser5 ናብ Tyr52 ተቐኒሱ። 3 ወይ 4 N-terminal ወይ 13 C-terminal ተረፍ መረፍ ጽቕጥቕጥ ኣይተራእየን (ስእሊ S1)። ካብቲ ዱር-ዓይነት ጽግዕተኛ ዝተዳለወ ዝተሓዋወሰ RC-LH1 ኮምፕለክስ ብማስ ስፔክትሮሜትሪ ትንተና እቲ ዝጎደለ ዞባ ውጽኢት ሄተሮሎጂካዊ ምብትታን ናይዞም ፔፕታይድስ ምዃኑ ኣርእዩ (ስእሊ S1ን S2ን)። N-terminal formylation ናይ α-Met1 እውን ተራእዩ እዩ (f)። እቲ ትንተና ከም ዘመልክቶ፡ እቲ α-ፔፕታይድ ካብ ተረፍ መረፍ fMet1 ክሳብ Asp42/Ala46/Ala47/Ala50 ዝቖመ ኮይኑ፡ እቲ β-ፔፕታይድ ድማ ካብ ተረፍ መረፍ Ser2 ክሳብ Ala53 ዝቖመ ኮይኑ፡ እዚ ድማ ምስቲ ትሑት ሙቐት ዘለዎ EM ጽቕጥቕጥ ካርታ ጽቡቕ ስምምዕ ኣለዎ።
ምውህሃድ α-His29ን β-His36ን ንBChls ፊት ንፊት ይገብሮም፤ ነፍሲ ወከፍ αβ ሄተሮዳይመር ምስ ጎረባብቱ ተኣኪቡ ኣብ ዙርያ RC ክፉት ሉፕ (RC-LH114-W) ወይ ዕጹው ሉፕ (RC-LH116) ይፈጥር The exciton coupled pigment array (ስእሊ 1, C and D)። ምስቲ 877 ና.ሜ ባንድ RC-LH114-W እንትነፃፀር 880 ና.ሜ ዝምጠጥ ቀይሕ ምዝንባል RC-LH116 3 ና.ሜ እዩ (ስእሊ 2ሀ)። ይኹን እምበር እቲ ክቢ ዳይክሮይዝም ስፔክትረም ዳርጋ ሓደ እዩ (ስእሊ 2ለ)፣ እዚ ድማ ኣብ መንጎ ክፉትን ዕፁዋትን ሉፕስ ንጹር ፍልልይ እኳ እንተሃለወ፣ ከባብያዊ ሃዋህው BChls ኣዝዩ ተመሳሳሊ ምዃኑ ዘመልክት እዩ። እቲ ናይ ምምጣጥ ቀይሕ ምዝንባል ውጽኢት ምጉዳል ምንቅስቓስ ሙቐትን ምውሳኽ ምርግጋእን ኣብቲ ዕጹው ሉፕ (18, 19)፡ ብሰንኪ እቲ ዕጹው ሉፕ ዝመጽእ ለውጢ ኣብ ምትእስሳር ቀለም (20, 21)፡ ወይ ውህደት ናይዞም ክልተ ጽልዋታት (11) ክኸውን ይኽእል።
(ሀ) ኣልትራቫዮሌት/ዝርአ/ቀረባ ትሕተ ቀይሕ ምምጣጥ ስፔክትረም፣ ጫፋቱ ብተዛመድቲ ቀለም ምልክት ዝተገብረሎምን ኣብ 775 ና.ሜ ናብ ጫፍ BPh ንቡር ዝኾኑን እዮም። (B) ክቢ ዳይክሮይዝም ስፔክትረም ናብ BChl ምምጣጥ ኣብ 805 ና.ሜ ንቡር ዝኾነ። (C and D) ካብቶም ብግዜ ዝተፈትሑ ናይ ምምጣጥ ስፔክትራታት RC-LH114-W complex (C)ን RC-LH116 complex (D)ን ዝተመርጹ ΔA ስፔክትራታት። ንዝሓሸ ምውድዳር ኩሎም ስፔክትራታት ናብ ∆A ናይ −A ኣብ 0.2 ps ንቡር ይኾኑ። (E) ድሕሪ ጨረርታ ኣብ ህላወ ዝተፈላለየ ትሕዝቶ UQ2 ዝፍጠር ፍጥነት ኦክሳይድ ሳይቶክሮም c2 (ንጥረ መረዳእታ ስእሊ S8 ርአ)። (F) ኣብ ትሕቲ ትሑት፣ ማእከላይ ወይ ልዑል ጽዓት ዘለዎ ብርሃን (10፣ 30 ወይ 300μMm-2 s-1፣ ብቕደም ተኸተል) ኣብ ዝዓበዩ ዋህዮታት፣ ኣብቲ ዝተጸረየ ውህደትን ዝተፈለየ ሽፋን ሬሽዮን ዝርከቡ ፕሮቲን Wን RC-Lን ንኡሳን ኣሃዱታት። ደረጃ ፕሮቲን ብSDS-polyacrylamide gel electrophoresisን immunoassayን ምውሳን (ንጥረ መረዳእታ ስእሊ S9 ርአ)። ምስቲ ዝተጸረየ RC-LH114-W ኮምፕለክስ ብተዛማዲ ዘሎ ሬሽዮ ውሰድ። ስቶይኪዮሜትሪክ ሬሽዮ RC-L ምስ ፕሮቲን-W ናይቲ ኮምፕለክስ 1:1 እዩ።
ኣብቲ ዝተበላሸወ αβ14 ሉፕ ናይ RC-LH114-W (ስእሊ 1, A, C, and E) ኣብ ቦታ 1 ዝርከቡ BChls ካብቶም ኣብ RC-LH116 ዘለዉ ተመጣጣኒ BChls ብ6.8Å ናብ RC ቀዳማይ ለጋሲ (P) ዝቐረቡ እዮም (ስእሊ 1, B, D, and F, and Figure S3); እንተኾነ ግን፡ ሓላፊ ምምጣጥ ቅልጣፈ ናይ ክልቲኦም ውህደታት ከም ዘመልክቶ፡ ንRC-LH114-Wን RC-LH116ን፡ ካብ LH1 ናብ RC ዝመጽእ ናይ ምልዕዓል ጸዓት ምትሕልላፍ ግዜ ቀወምቲ 40 ±4ን 44±3ን ps (ስእሊ 2) እዩ። ፣ Cን Dን፣ ስእሊ S4ን ሰሌዳ S2ን)። ኣብ ውሽጢ RC ኣብ ኤሌክትሮኒካዊ ምትሕልላፍ እውን ርኡይ ፍልልይ የለን (ስእሊ S5ን ተዛማዲ ተወሳኺ ፅሑፍን)። ኣብ መንጎ LH1ን RC-Pን ዘሎ ናይ ጸዓት ምትሕልላፍ ግዜ ጥቡቕ ምትእስሳር ብሰንኪ ተመሳሳሊ ርሕቀት፣ ኩርናዕን ዓቕሚ ጸዓትን ዝበዝሑ BChl ኣብ ክልቲኡ LH1 ሉፕስ ምዃኑ ንጥርጥር። ኣብቲ ዝተሓተ ርሕቀት ንምብጻሕ ንናይ LH1 ጸዓት ቅዲ ምድህሳስ ካብ ቀጥታዊ ምትሕልላፍ ጸዓት ካብ ትሕቲ ምቹእ ቦታታት ናብ RC ዝቐልጠፈ ኣይመስልን። እቲ ኣብ RC-LH114-W ዘሎ ክፉት-ሉፕ LH1 ሉፕ እውን ንመዋቕራዊ ትንተና ኣብ ትሕቲ ትሑት ኩነታት ሙቐት ቁምነገር ዘይብሉ ምንቅስቓስ ሙቐት ክገብር ይኽእል እዩ፣ ከምኡ’ውን ኣብ ናይ ክፍሊ ሙቐት ካብቲ ኣብ RC 1 ዝርከብ ናይ βBChls ርሕቀት ቀለም ዝነውሐ αβ14 ቀለቤት ቅርጺ ኣሎ።
RC-LH116 ኮምፕለክስ 32 BChlsን 16 ካሮቲኖይድን ዝሓዘ ኮይኑ፡ ሓፈሻዊ ኣወዳድባኡ ምስቲ ካብ Thermochromatium (Tch.) pidpidum [Protein Data Bank (PDB) ID 5Y5S] (9), Thiorhodovibrio (Trv.) 970 strain ( PDB ID 7C9R) (12)ን ቀጠልያን ዝተረኽበ ሓደ እዩ። ኣልጌ (Blc.viridis) (ፒዲቢ ID 6ET5) (10)። ድሕሪ ኣሰላልፋ ኣብ ኣቀማምጣ αβ ሄተሮዳይመርስ ንኣሽቱ ምዝንባላት ጥራይ እዮም ተራእዮም፣ ብፍላይ 1-5፣ 15ን 16ን (ስእሊ S6)። ህላወ ፕሮቲን-W ኣብ ኣቃውማ LH1 ዓቢ ጽልዋ ኣለዎ። ሰለስተ TMHታቱ ብሓጸርቲ ሉፕ ዝተኣሳሰሩ ኮይኖም፡ እቲ N-terminal ኣብ ሉመን ሸነኽ ናይቲ ኮምፕለክስ፡ እቲ C-terminal ድማ ኣብ ሳይቶፕላዝማዊ ሸነኽ (ስእልታት 1Aን 3ን፡ A ክሳብ D)። ፕሮቲን-W ብዓቢኡ ሃይድሮፎቢክ እዩ (ስእሊ 3B)፣ TMH2ን TMH3ን ድማ ምስ LH1αβ-14 ብምትሕብባር ትራንስሜምብሬን ገጽ ይፈጥሩ (ስእሊ 3፣ Bን E ክሳብ Gን)። እቲ መጋጠሚ ብቐንዱ ኣብ ትራንስሜምብሬን ዞባ ብዝርከቡ ተረፍ መረፍ Phe, Leuን Valን ዝቖመ እዩ። እዞም ተረፍ መረፍ ብሃይድሮፎቢክ ኣሚኖ ኣሲዳትን αβ-14 ቀለምን ተደራሪቦም ይርከቡ። ገለ ፖላር ተረፍ መረፍ እውን ኣብቲ ምትእስሳር ኣበርክቶ ይገብሩ፣ ኣብ መንጎ W-Thr68ን β-Trp42ን ኣብ ልዕሊ እቲ ዝተሓላለኸ ጕድጓድ ዘሎ ናይ ሃይድሮጅን ምትእስሳር ሓዊሱ (ስእሊ 3፣ Fን Gን)። ኣብ ገጽ ሳይቶፕላዝም Gln34 ምስቲ ኬቶ ጉጅለ αβ-14 ካሮቲኖይድስ ይቐርብ። ብተወሳኺ፡ እቲ n-dodecyl β-d-maltoside (β-DDM) ዝበሃል ሞለኪዩል ተፈቲሑ፡ እቲ ሃይድሮፎቢክ ጭራኡ ድማ ናብቲ ኣብ መንጎ ፕሮቲን-Wን αβ-14ን ዘሎ መጋጠሚ ተዘርጊሑ፡ እቲ ጭራ ሽኮር ድማ ኣብ ኣካላት ክህሉ ይኽእል። ብተወሳኺ C-terminal resolution regions ናይ ፕሮቲን Wን RCHን ኣዝዮም ቀረባ ምዃኖም ኣስተብሂልና ኢና፣ ግን ኣብ ውሽጢ ስፍሓት ምፍጣር ፍሉይ ምትእስሳር ከምዘይኮነ ኣስተብሂልና (ስእሊ 1, A and E)። ይኹን እምበር ኣብቶም ዘይተፈትሑ C-terminal amino acids ናይዞም ክልተ ፕሮቲናት ምትእስሳር ክህሉ ይኽእል እዩ፣ እዚ ድማ ኣብ እዋን ምትእኽኻብ RC-LH114-W complex ንመመልመሊ ፕሮቲን-W መካኒዝም ክህብ ይኽእል።
(ሀ) ፕሮቲን-W፡ ብመልክዕ ካርቱን ምስ LH1αβ14 ንመጋጠሚ ገጹ ዝጥምት፡ በትሪ ቅርጺ ዘለዎ ጎናዊ ሰንሰለት (ቀይሕ) ኣለዎ፡ ኣብ ሓደ ክፋል ናይቲ ኤሌክትሮስታቲክ ፖተሽናል ስእላዊ ስእሊ (ግሉጽ ግራጭ ገጽ ምስ ደረጃ ቅርጺ 0.13) ተገሊጹ። (B) ፕሮቲን-W ብሃይድሮፎቢክ ሕብራዊ ገጽ ዝውከል። ፖላርን ቻርጅ ዘለዎምን ከባቢታት ብሳይን፣ ሃይድሮፎቢክ ቦታታት ብጻዕዳ፣ ብሓያል ሃይድሮፎቢክ ቦታታት ድማ ብኣራንሺ ይርኣዩ። (C and D) ፕሮቲን-W ብካርቱን ዝተወከለ፣ ኣንፈቱ ከምቲ ኣብ (A) (C) ዘሎ እዩ፣ ብ180° (D) ድማ ዝዘውር እዩ። ብመሰረት ኣብቲ መስርዕ ዘሎ ኣቀማምጣ፡ እቶም ክፍለዩ ዝኽእሉ ተረፍ መረፍ ቀስተ ደመና ሕብሪ ስኬም ይኽተሉ፡ ኣብዚ N-terminal ሰማያዊ፡ C-terminal ድማ ቀይሕ እዩ። (E) ፕሮቲን-W ብተመሳሳሊ ትርኢት ከምቲ ኣብ (A) ዘሎ፣ ኣብ መጋጠሚ ፕሮቲን-W:LH1 ዝርከቡ ተረፍ መረፍ ድማ ብዝተተሓሓዙ ምልክታት ብዝተተሓሓዙ በትሪ ይውከሉ። (F) ፕሮቲን-W ኣብቲ ናይ ካርቱን ውክልና ብተዛማዲ ምስ (E)ን LH1αβ14ን 90° ይዘውር፣ ኣብቲ ባር ውክልና ድማ ብተዛማዲ ምስ ናይ መተሓላለፊ ተረፍ መረፍ ይዘውር። ካብቲ ቤታ ፖሊፔፕታይድ ዝወጽእ ልዕሊ ዓቐን ተንጠልጢሉ ዘሎ ተረፍ መረፍ ምልክት ይግበረሉ። እቲ ኮፋክተር ምስ ሕብሪ ስእሊ 1 ዝሰማማዕ ባር ኮይኑ፣ እቲ ዝበስበሰ β-DDM ብግራጭ፣ እቲ ኦክስጅን ድማ ብቐይሕ ተራእዩ ኣሎ። (G) እቲ ኣብ (F) ዘሎ ትርኢት 180° ዝዘውር ኮይኑ፡ ምስቲ ጐሊሑ ዝረአ ተረፍ ናይቲ ምልክት ዘለዎ ኣልፋ ፖሊፔፕታይድ ኣለዎ።
ፕሮቲን-W ንሓደ αβ ሄተሮዳይመር (ኣብ ስእሊ 1F መበል 15) ይትክኦ፣ በዚ ድማ ምዕጻው ሉፕ ይከላኸልን ነተን ቀዳሞት ሰለስተ αβ ሄተሮዳይመር ይግልበጥን። ዝለዓለ ናይ ምዝንባል ኩርናዕ ናይቲ ቀዳማይ αβ-1 ሄተሮዳይመር ብተዛማዲ ምስቲ ፊልም ንቡር ካብ 25° ክሳብ 29° (ስእሊ 1, A and E) ምዃኑ ተዓዚብና፣ እዚ ድማ ብ2° ክሳብ 8° ምዝንባል αβ-1 ኣብ RC A sharp contrast-LH116 (ስእሊ 1, B and F) ዝተፈጥረ እዩ። ካልኣይን ሳልሳይን ሄተሮዳይመርስ ብቕደም ተኸተል ካብ 12° ክሳብ 22°ን ካብ 5° ክሳብ 10°ን ዝዘንበሉ እዮም። ብሰንኪ ስቴሪክ ዕንቅፋት RC፡ ምግልባጥ αβ-1 ነቲ ካልኣይ ጽምዲ αβ (እዚ ምስቲ ኣብ ስእሊ 1F ዘሎ መበል 16 αβ ዝሰማማዕ) ኣየጠቓልልን፣ በዚ ድማ ኣብ ቀለቤት LH1 ንጹር ክፍተት ይፈጥር (ስእሊ 1, A and E) ። ብሰንኪ ሕጽረት ክልተ αβ ሄተሮዳይመርስ፡ ብክሳራ ኣርባዕተ BChlን ክልተ ካሮቲኖይድን፡ ዝኾነ ካብቶም ካሮቲኖይድ ምስቲ ዝተጠዋወየ αβ-1 ንኡስ ኣሃዱ ኣይተኣሳሰርን፡ ውጽኢቱ ድማ 13 ካሮቲኖይድ ቬጀቴሪያንን 28 BChlsን ዝሓዘ LH114-W ቀለቤት ይኸውን። ኣብ αβ1 ክሳብ 7 ዞባታት ዝርከቡ ክልተ ውህደታት ግምታት ከባብያዊ ርዝነት ካብቶም ዝተረፉ LH1 ሉፕ ዝወሓደ ኮይኑ፡ እዚ ድማ ነቲ ምስ RC QB ሳይት ዝዳወብ LH1 ንኡስ ኣሃዱ ባህርያዊ ፕላስቲሲቲ ከንጸባርቕ ይኽእል እዩ (ስእሊ 4) ።
ስእልታት RC-LH114-W (A and B)ን RC-LH116 (C and D)ን ካብ ሓደ ዓይነት ላዕለዋይ ትርኢት/ጎኒ ትርኢት (A and B) (A and C) ከምኡ እውን ካብ ስእሊ 1. (B and D) ዝረአ ገፅ ካቪቲ ተገሊፁ ኣሎ። እቶም ሕብራዊ መፍትሕታት ብየማን ተገሊጾም ኣለዉ።
እቲ እንኮ ካልእ ባህርያዊ ኮር ኮምፕለክስ 1:14 ስቶይኪዮሜትሪክ ሬሽዮ ዘለዎ ሮዶኮከስ ስፋሮይድስ (Rba.) RC-LH1-PufX ዳይመር (13) እዩ። ይኹን እምበር ፕሮቲን Wን PufXን ርኡይ ምምስሳል የብሎምን፡ ኣብ ነፍሲ ወከፎም LH1 ኣቃውማኦም ድማ ርኡይ ጽልዋ ኣለዎም። PufX ምስ Rps ዝሰማማዕ ቦታ ምስ ሳይቶፕላዝማዊ ወገን ናይ RC-H ንኡስ ኣሃዱ (13) ዝራኸብ N-terminal cytoplasmic domain ዘለዎ ንጽል TMH እዩ። ፓሉስትሪስ LH116αβ-16። PufX ኣብ መንጎ RC-LH1ን ሳይቶክሮም bcl ኮምፕለክስን ንዝግበር ምልውዋጥ ኲኖን/ኲኖሎን ቻነል ይፈጥርን ኣብ ኩሉ Rba ይርከብ። ስፋሮይድስ ኮር ኮምፕለክስ (13)። ዋላ እኳ እቲ ሞኖመር-ሞኖመር መተሓላለፊ ኣብ Rba እንተኾነ። እቲ ስፋይሮይድስ RC-LH1-PufX ዳይመር ኣብ መእሰሪ ቦታ ፕሮቲን W ኣብ RC-LH114-W ይርከብ፣ እቲ ብPufXን ፕሮቲን-Wን ዝለዓዓል ክፍተት ድማ ኣብ ተመጣጣኒ ቦታ እዩ (ስእሊ S7A)። ኣብ RC-LH114-W ዘሎ ክፍተት ምስቲ ምስ ፕሮቲን W ወይ PufX ብዘይተኣሳሰር ፔፕታይድ ዝፍጠር ግምታዊ ኲኖን ቻነል (8) ናይ Pseudomonas rosea LH1 እውን ይሰማማዕ እዩ (ስእሊ S7B)። ብተወሳኺ ኣብ Blc ዝርከብ quinone channel. እቲ ሓደ γ ንኡስ ኣሃዱ (7) ብምግላል ዝፍጠር ኤመራልድ ቀጠልያ LH1 ኣብ ተመሳሳሊ ቦታ ይርከብ (ስእሊ S7C)። ዋላ እኳ ብዝተፈላለዩ ፕሮቲናት ዝመሓላለፍ እንተኾነ፡ ምምጻእ ናይዞም ኲኖን/ኲኖሎል ቻነላት ኣብ ናይ ሓባር ቦታ ኣብቲ RC-LH1 ኮምፕለክስ ኣብነት ናይ ምትእኽኻብ ፍልቀት ይመስል፡ እዚ ድማ እቲ ብፕሮቲን W ዝፍጠር ክፍተት ከም ኲኖን ቻነል ክሰርሕ ከም ዝኽእል የመልክት።
ኣብ LH114-W ሉፕ ዘሎ ክፍተት ኣብ መንጎ ውሽጣዊ ቦታ ናይቲ RC-LH114-W complexን እቲ ጅምላዊ ሽፋንን (ስእሊ 1G) ቀጻሊ ሽፋን ዞባ ንምፍጣር የኽእል፣ ኣብ ክንዲ ነቶም ክልተ ዶመይናት ብፕሮቲን ፖር ከም ኣብ ፕሮቲናት ምትእስሳር። እቲ RC-LH116 ዝበሃል ውህደት ምስ ዕጹው Tch ዝመሳሰል እዩ። መርፍእ ዝመስል ውህደት (22) (ስእሊ 1H)። ዝርገሐ ኲኖን ብመንገዲ ሽፋን ካብቲ ብጸቢብ ፕሮቲን ቻነል ዝግበር ዝርገሐ ዝቐልጠፈ ስለዝኾነ፡ እቲ ክፉት LH114-W ሉፕ ካብቲ ዕጹው LH116 ሉፕ ዝቐልጠፈ RC ምዝውዋር ከኽእል ይኽእል እዩ፡ ዝርገሐ ኲኖን ናብ RC ድማ ዝያዳ ድሩት ክኸውን ይኽእል። ፕሮቲን W ብመንገዲ RC ንመቐየሪ ኲኖናት ይጸልዎ ድዩ ኣይጸልዎን ንምፍታን፡ ኣብ ዝተወሰነ ትሕዝቶ ዩቢኲኖን 2 (UQ2) (ኣናሎግ ተፈጥሮኣዊ UQ10 ምስ ዝሓጸረ ጭራ ኣይሶፕሪን) ሳይቶክሮም ኦክሳይድ መርመራ ኣካይድና (ስእሊ 2E)። ዋላ እኳ ህላወ ቺለተድ ኲኖን ንልክዕ ምውሳን ርኡይ ቀዋሚ ማይካሊስ ዝዕንቅፍ እንተኾነ (RC-LH114-Wን RC-LH116ን ን0.2±0.1μMን 0.5±0.2μMን ዝምችኡ እዮም፣ ብቕደም ተኸተል)፣ ዝለዓለ ፍጥነት RC-LH114-W ( 4.6±0.2 e-RC-1 s-1) እዩ። ካብ RC-LH116 (3.6±0.1 e-RC-1 s-1) ብ28±5% ዝዓበየ እዩ።
ኣብ መጀመርታ ፕሮቲን-W ኣብ ኣስታት 10% ናይቲ ቀንዲ ውህደት ከምዘሎ ገሚትና (16)፤ ኣብዚ ትሑት ብርሃን ዘለዎም፣ ማእኸላይ ብርሃን ዘለዎምን ልዑል ብርሃን ዘለዎምን ዋህዮታት ዕብየት ዋህዮታት ምውናን ብቕደም ተኸተል % 15±0.6%፣ 11±1%ን 0.9±0.5ን እዩ (ስእሊ 2F)። ብዝሒ ምውድዳር ማስ ስፔክትሮሜትሪ ከም ዘርእዮ፡ ምውሳኽ ሂስቲዲን ታግ ምስ ዱር-ዓይነት ጽግዕተኛታት ክነጻጸር እንከሎ ኣንጻራዊ ብዝሒ ፕሮቲን-W ከም ዘይነከየ (P = 0.59)፡ ስለዚ እዞም ደረጃታት እዚኣቶም ናይ ዝተመሓየሸ ፕሮቲን-W ቅርሲ ኣይኮኑን (ስእሊ S10)። ይኹን እምበር እዚ ትሑት ተጠቃምነት ፕሮቲን-W ኣብ RC-LH1 ኮምፕለክስ ገለ RCs ብዝተቐላጠፈ ፍጥነት ክግልበጡ ከኽእሎም ይኽእል እዩ፣ በዚ ድማ ነቲ ኣብ RC-LH116 ኮምፕለክስ ዘሎ ዝሓሰረ ምልውዋጥ ኲኖን/ኲኖሎን ከቃልል ይኽእል። እቲ ልዑል መጠን ምውናን ብርሃን ምስቲ ኣብ ቀረባ እዋን ዝተረኸበ መረዳእታ ትራንስክሪፕቶሚክስ ዘይቃዶ ምዃኑ ኣስተብሂልና፣ እዚ ድማ መግለፂ ጂን pufW ኣብ ትሕቲ ሓያል ብርሃን ከም ዝውስኽ ዘመልክት እዩ (ስእሊ S11) (23)። ኣብ መንጎ pufW ትራንስክሪፕሽንን ፕሮቲን-W ምውህሃድን ኣብ RC-LH1 complex ዘሎ ፍልልይ ምድንጋር ዝፈጥር ኮይኑ ነቲ ዝተሓላለኸ ምቁጽጻር ናይቲ ፕሮቲን ዘንጸባርቕ ክኸውን ይኽእል።
ኣብ RC-LH114-W 6 ካርዲዮሊፒን (CDL)፣ 7 ፎስፋቲዲልኮሊን (POPC)፣ 1 ፎስፋቲዲልግሊሰሮል (POPG)ን 29 β-DDMን ሞለኪዩላት ተመዲቦም ኣብኡ 6 CDLs፣ 24 POPCs፣ 2 POPGsን 12 βDDMsን ሞዴል ይግበሩ። RC-LH116 (ስእሊ 5፣ ሀን ለን)። ኣብዞም ክልተ ኣቃውማታት፡ ሲዲኤል ዳርጋ ኣብ ሳይቶፕላዝማዊ ሸነኽ ናይቲ ኮምፕለክስ ክኸውን ከሎ፡ ፒኦፒሲ፡ ፒኦፒጂን β-ዲዲኤምን ድማ መብዛሕትኡ ግዜ ኣብ ሉሚናል ሸነኽ ይርከቡ። ክልተ ሞለኪዩላት ሽኮርን ዲተርጀንት ኣብ αβ-1 ክሳብ αβ-6 ዞባ ናይቲ RC-LH114-W complex ተነጺሎም (ስእሊ 5A)፣ ሓሙሽተ ድማ ኣብቲ ተመጣጣኒ ዞባ RC-LH116 ተነጺሎም (ስእሊ 5B)። ኣብቲ ካልእ ወገን ናይቲ ውህደት ዝያዳ ሽኮር ተረኺቡ፣ ብቐንዱ CDL፣ ኣብ መንጎ RCን αβ-7ን ክሳብ αβ-13ን ዝተዋህለለ (ስእሊ 5፣ Aን Bን)። ካልኦት ብመዋቕራዊ መንገዲ ዝተፈትሑ ሽኮርን ዲተርጀንት ካብ LH1 ቀለቤት ወጻኢ ይርከቡ፣ ጽቡቕ ፍታሕ ዘለዎም ኣሲል ሰንሰለታት ድማ ኣብ መንጎ LH1 ንኡሳን ኣሃዱታት ይዝርግሑ፣ ብተዛማዲ ኣብ RC-LH114-W β-DDM ተባሂሎም ተጸዊዖም፣ ኣብ RC ድማ β-DDM ተባሂሎም ይግለጹ A ምትሕውዋስ β-DDMን POPC-LH116ን። ኣብ ኣቃውማና ተመሳሳሊ ኣቀማምጣ ቺለቲንግ ሊፒድስን ዲተርጀንትስን ብስነ-ኣካላዊ ኣገባብ ኣገደስቲ መእሰሪ ቦታታት ምዃኖም የመልክት (ስእሊ S12A)። ኣብ Tch ዝርከቡ ኣቀማምጣ ተመጣጣኒ ሞለኪዩላት እውን ጽቡቕ ቅኑዕነት ኣለዎም። ለዋህን ትርቭን. ጽግዕተኛ 970 RC-LH1s (ስእሊ S12, B ክሳብ E) (9, 12) ከምኡ’ውን ሃይድሮጅን-ምትእስሳር ተረፍ ናይቲ ሽኮር ርእሲ ጉጅለ ኣብ መስርዕ ኣሰላልፋ ብመጠኑ ጽቡቕ ዕቃበ ኣርእዮም (ስእሊ S13), እዚ ድማ ምስ RC ዝጣበቕ Conserved CDL (24)፣ እዞም ቦታታት ኣብ RC-LH1 ውህደት ክዕቀቡ ከም ዝኽእሉ የመልክት።
(A and B) RC-LH114-W (A)ን RC-LH116 (B)ን ፔፕታይድስ ብካርቱን ይውከሉ፣ እቶም ቀለም ድማ ብበትሪ ይውከሉ፣ ኣብ ስእሊ 1 ዘሎ ሕብራዊ ስርዓት ተጠቒሞም።ሽኮር ብቐይሕ፣ ዲተርጀንት ድማ ብግራጭ ተገሊጾም ኣለዉ። ምስ RC QAን QBን ቦታታት ዝተኣሳሰረ UQ ብጫ ክኸውን ከሎ፡ ዝተነጸለ UQ ድማ ሰማያዊ እዩ። (C and D) ተመሳሳሊ ኣረኣእያታት ከም (A)ን (B)ን፣ ሽኮር ተገዲፉ። (E to G) ካብ RC-LH116 ዝተዓብለለ ትርኢት Q1(E)፣ Q2(F)ን Q3(G)ን፣ ምስ ነንሕድሕዶም ዝጸልዉ ጎናዊ ሰንሰለታት። እቶም ናይ ሃይድሮጅን ምትእስሳር ከም ጸሊም ስርዝ ድልዝ መስመራት ተገሊጾም ኣለዉ።
ኣብ RC-LH116 ክልቲኦም ኣብ መስርሕ ምፍላይ ቻርጅ ኣብ ምትሕልላፍ ኤሌክትሮን ዝሳተፉ RC QAን QB UQን ኣብ መእሰሪ ቦታታት ይበስብሱ። ይኹን እምበር ኣብ RC-LH114-W QB quinone ፍታሕ ስለዘይረኸበ ኣብ ታሕቲ ብዝርዝር ክዝረበሉ እዩ። ብዘይካ QAን QBን quinones ክልተ chelated UQ ሞለኪዩላት (ኣብ መንጎ RCን LH1ን ቀለቤታት ዝርከቡ) ኣብ RC-LH114-W ቅርጺ ብመሰረት ጽቡቕ ፍታሕ ዘለዎም ርእሲ ጉጅለታቶም (ብቕደም ተኸተል ኣብ Q1ን Q2ን ዝርከቡ) ይምደቡ። ቦታ)። ስእሊ 5ሐ)። ክልተ ኣሃዱታት ኣይሶፕሪን ናብ Q1 ይምደቡ፣ እቲ ካርታ ጽፍሒ ድማ ንሙሉእ 10 ጭራታት ኣይሶፕሪን ናይ Q2 ይፈትሖም። ኣብ ኣቃውማ RC-LH116፡ ሰለስተ chelated UQ10 ሞለኪዩላት (Q1 ክሳብ Q3፡ ስእሊ 5D) ተፈቲሖም፡ ኩሎም ሞለኪዩላት ድማ ኣብ ምሉእ ጭራ ንጹር ጽፍሒ ኣለዎም (ስእሊ 5፡ D ክሳብ G)። ኣብ ክልቲኦም መዋቕራት፡ ኣቀማምጣ ናይቶም ናይ Q1ን Q2ን ርእሲ ጉጅለታት ኲኖን ብሉጽ ቅኑዕነት ኣለዎም (ስእሊ S12F)፡ ምስ RC ጥራይ ድማ ይራኸቡ። Q1 ኣብ መእተዊ W ክፍተት RC-LH114-W (ስእሊ 1Gን 5ን፣ C፣ Dን Eን)፣ Q2 ድማ ኣብ ጥቓ QB መእሰሪ ቦታ (ስእሊ 5፣ C፣ D)ን Fን) ይርከብ። እቶም ዝተዓቀቡ L-Trp143ን L-Trp269ን ተረፍ መረፍ ናብ Q1ን Q2ን ኣዝዮም ዝቐረቡ ኮይኖም π-stacking interactions ዝህቡ እዮም (ስእሊ 5, E and F, and Figure S12)። ካብ ርሑቕ ኦክስጅን Q1 3.0 Å ርሒቑ ዝርከብ L-Gln88 ድልዱል ናይ ሃይድሮጅን ምትእስሳር ይህብ (ስእሊ 5E)፤ እዚ ተረፍ እዚ ብዘይካ እቲ ኣዝዩ ርሑቕ ዝምድና ኣብ ኩሎም RCs ይዕቀብ (ስእሊ S13)። L-Ser91 ኣብ መብዛሕትኦም ካልኦት RCs ብዓቃባዊ መንገዲ ንThr ዝተተክአ እዩ (ስእሊ S13)፣ ካብ ሜቲል ኦክስጅን Q1 3.8 Angstroms እዩ፣ ድኹም ናይ ሃይድሮጅን ምትእስሳር ክህብ ይኽእል እዩ (ስእሊ 5E)። Q3 ፍሉይ ምትእስሳር ዘለዎ ኣይመስልን፣ ግን ኣብ መንጎ RC-M ንኡስ ኣሃዱን LH1-α ንኡስ ኣሃዱ 5 ክሳብ 6ን ኣብ ዝርከብ ሃይድሮፎቢክ ዞባ እዩ ዝርከብ (ስእሊ 5፣ Dን Gን)። Q1, Q2 and Q3 ወይ ኣብ ቀረባ ዝርከቡ ቺለድ ኲኖናት እውን ኣብ Tch. ልኡም፣ ትርቭ. ስትሬይን 970ን Blcን ዝበሃሉ ምዃኖም ይፍለጥ። እቲ ናይ ኢሪስ ኣቃውማ (9, 10, 12) ኣብ RC-LH1 ኮምፕለክስ ንዝተዓቀበ ሓጋዚ ኲኖን መእሰሪ ቦታ የመልክት (ስእሊ S12G)። ኣብ RC-LH116 ዝርከቡ ሓሙሽተ ዝበስበሱ UQs ምስቲ ብላዕለዋይ ብቕዓት ፈሳሲ ክሮማቶግራፊ (HPLC) ዝተወሰነ 5.8±0.7 ናይ ነፍሲ ወከፍ ኮምፕለክስ ጽቡቕ ስምምዕ ዘለዎም ክኾኑ ከለዉ፡ ኣብ RC-LH114-W ዝርከቡ ሰለስተ ዝበስበሱ UQs ድማ ካብ The measured value of 6.2±0.3 (ስእሊ S14) ኣብቲ መዋቕር ዘይተፈትሑ UQs ከምዘለዉ ዘመልክት እዩ።
እቶም ስውር ሲሜትሪክ Lን Mን ፖሊፔፕታይድስ ነፍሲ ወከፎም ሓሙሽተ TMHs ዝሓዙ ኮይኖም ሓደ BChl ዳይመር፣ ክልተ BChl ሞኖመር፣ ክልተ ባክተርዮፋጅ (BPh) ሞኖመር፣ ከምኡ እውን ሓደ ዘይ-ሄም ሓፂንን ሓደ ወይ ክልተ UQ10 ሞለኪዩላትን ዘወሃህድ ሄተሮዳይመር ይፈጥሩ። ብመንገዲ ህላወ ናይ ሃይድሮጅን ምትእስሳር ኣብቲ ተርሚናል ኬቶን ጉጅለን ፍሉጥ ምውህላል ኣብ Rpsን፡ ካሮቲኖይድ ኣብቲ M-subunit ይሕወሱ፡ እዚ ድማ cis-3,4-dehydroorhodopin ይበሃል። ዓሌታት (25)። ናይ RC-H ደጋዊ ሽፋን ዓውዲ ብሓደ TMH ኣብቲ ሽፋን ይተኣሳሰር። ሓፈሻዊ ኣቃውማ RC ምስቶም ሰለስተ ንኡሳን ኣሃዱታት RC ናይ ተዛመድቲ ዓይነታት (ከም Rba) ዝመሳሰል እዩ። ስፋሮይድስ (PDB ID: 3I4D) ዝብል ምዃኑ ይፍለጥ። ማክሮሳይክላት BChlን BPhን፣ ካሮቲኖይድ ዓንዲ ሕቖን ዘይ-ሄም ሓፂንን ኣብ ውሽጢ ውሳነ ደረጃ ናይዞም መዋቕራት ይደራረቡ፣ ከምኡ እውን ኣብ QA ሳይት ዝርከብ UQ10 ርእሲ ጉጅለን ኣብ RC-LH116 ዝርከብ QB quinoneን (ስእሊ S15)።
ዝተፈላለየ ናይ QB ቦታ ምውናን ደረጃ ዘለዎም ክልተ RC መዋቕራት ምህላዎም ነቲ ምስ QB quinone binding ዝኸይድ ቅኑዕ ቅርጺ ዘለዎ ለውጢ ንምምርማር ሓድሽ ዕድል ይህብ። ኣብቲ RC-LH116 complex፡ QB quinone ኣብቲ ምሉእ ብምሉእ ዝተኣሰረ “proximal” position (26) ይርከብ፡ ምፍላይ RC-LH114-W ግን QB quinone የብሉን። ኣብ RC-LH114-W QB quinone የለን፣ እዚ ድማ እቲ ኮምፕለክስ ንጡፍ ስለዝኾነ ዘገርም እዩ፣ ካብቲ RC-LH116 complex ምስ structurally resolved QB quinone ንላዕሊ። እቶም ክልተ LH1 ቀለቤታት ኣስታት ሽዱሽተ ኲኖናት ቺለት እኳ እንተኾኑ፡ ሓሙሽተ ኣብቲ ዕጹው RC-LH116 ቀለቤት ብመዋቕራዊ መንገዲ ክፈትሑ እንከለዉ፡ ኣብቲ ክፉት RC-LH114-W ቀለቤት ግን ሰለስተ ጥራይ ብመዋቕራዊ መንገዲ ድሩታት እዮም። እዚ ወሰኽ መዋቕራዊ ጸገም፡ ቅልጡፍ ምትካእ RC-LH114-W QB ቦታታት፡ ቅልጡፍ ኲኖን ቅልጣፈ ኣብቲ ዝተሓላለኸ፡ ከምኡ’ውን ምውሳኽ ተኽእሎ ናይ ምስጋር LH1 ሉፕ ዘንጸባርቕ ክኸውን ይኽእል። ኣብ RC QB ሳይት RC-LH114-W UQ ዘይምህላው ውጽኢት ዝያዳ ዝተሓላለኸን ዝያዳ ንጡፍን ኮምፕለክስ ክኸውን ከም ዝኽእል ንእምት፣ QB ሳይት RC-LH114-W ድማ ብቕጽበት ኣብ UQ turnover ፍሪዝ ኮይኑ ኣሎ እቲ ፍሉይ ደረጃ (መእተዊ ናብ QB ሳይት ተዓጽዩ ኣሎ) ንኮንፎርሜሽን ናይዚ ንጥፈት ዘንጸባርቕ እዩ።
ብዘይ QB፡ እቲ ምስኡ ዝኸይድ ምዝዋር L-Phe217 ናብ ምስ UQ10 ምትእስሳር ዘይቃዶ ቦታ፡ ምኽንያቱ ምስቲ ቀዳማይ ኣይሶፕሪን ኣሃዱ ናይቲ ጭራ ቦታዊ ምግጫው ስለዘስዕብ (ስእሊ 6A)። ብተወሳኺ፡ እቶም ርኡይ ቀንዲ ለውጥታት ቅርጺ ርኡያት እዮም፡ ብፍላይ እቲ helix de (ሓጺር ሄሊክስ ኣብ ሉፕ ኣብ መንጎ TMH Dን Eን) L-Phe217 ናብ QB መእሰሪ ጁባን ምዝዋር L-Tyr223ን ዝግዕዝ (ስእሊ 6A ) ነቲ ናይ ሃይድሮጅን ምትእስሳር ምስ M-Asp45 ፍሬምዎርክ ንምብታኽን መእተዊ ናይቲ QB መእሰሪ ቦታ ንምዕጻውን (ስእሊ 6ለ)። Helix de pivots ኣብ መሰረቱ፣ Cα ናይ L-Ser209 ብ 0.33Å ይንቀሳቐስ፣ L-Val221Cα ድማ ብ 3.52Å ይንቀሳቐስ። ኣብ TMH Dን Eን ዝረአ ለውጢ የለን፣ እዚኦም ድማ ኣብ ክልቲኡ መዋቕራት ተደራሪቦም እዮም (ስእሊ 6A)። ክሳብ ንፈልጦ እዚ ኣብቲ ተፈጥሮኣዊ RC ንመጀመርታ ግዜ ንQB ሳይት ዝዓጽዎ መዋቕር እዩ። ምስቲ ምሉእ (QB-bound) ኣቃውማ ምውድዳር ከም ዘመልክቶ፡ ቅድሚ እቲ ኲኖን ምንካይ፡ ናብቲ ኲኖን ንኽኣቱ፡ ቅርጻዊ ለውጢ ከም ዘድሊ ይሕብር። L-Phe217 ምስቲ ናይ ኲኖን ርእሲ ጉጅለ π-stacking interaction ንምፍጣር ይዘውር፣ እቲ ሄሊክስ ድማ ናብ ደገ ይግዕዝ፣ እዚ ድማ ዓጽሚ ናይ L-Gly222ን ጎናዊ ሰንሰለት ናይ L-Tyr223ን ርጉእ ናይ ሃይድሮጅን ምትእስሳር ኣቃውማ ዘለዎ ናይ ሃይድሮጅን ምትእስሳር መርበብ ክፈጥሩ የኽእሎም (ስእሊ 6, A and C)።
(ሀ) ተደራራቢ ካርቱን ናይ ሆሎግራም (L ሰንሰለት፣ ኣራንሺ/M ሰንሰለት፣ ማጀንታ)ን ኣፖ (ግራጭ)ን ኣቃውማ፣ ኣብኡ እቶም ቁልፊ ተረፍ መረፍ ብመልክዕ በትሪ ዝመስል ውክልና ይረኣዩ። UQ10 ብብጫ ባር ይውከል። እቲ ነጥቢ ዘለዎ መስመር ኣብ ምሉእ እቲ ኣቃውማ ዝተፈጥረ ናይ ሃይድሮጅን ምትእስሳር የመልክት። (B and C) እቲ ናይ ገጽ ውክልና ናይቲ ኣፖሊፖፕሮቲንን ምሉእ ቀለቤት ኣቃውማን፣ ንጐድናዊ ሰንሰለት ኦክስጅን ናይ L-Phe217 ብሰማያዊን L-Tyr223 ብቀይሕን ብቕደም ተኸተል ዘጉልሕ። እቲ L ንኡስ ኣሃዱ ኣራንሺ እዩ፤ እቶም Mን Hን ዝበሃሉ ንኡሳን ኣሃዱታት ሕብሪ የብሎምን። (D and E) ኣፖሊፖፕሮቲን (D)ን ምሉእ (E)ን RC QB ቦታታት [ሕብሪ ብ (A) ብቕደም ተኸተል] ከምኡ’ውን Thermophilus thermophilus PSII (ቀጠልያ፣ ሰማያዊ ምስ ፕላስቲክ ኲኖን፤ PDB ID: 3WU2) ኣሰላልፉ (58)።
ብዘይተጸበናዮ መንገዲ፡ ዋላ’ኳ ሓያሎ ኣቃውማታት ናይ QB-deficient RCs ብዘይ LH1 እንተሃለዉ፡ ኣብዚ መጽናዕቲ ዝተራእየ ናይ ቅርጺ ለውጢ ግን ቅድሚ ሕጂ ኣይተገልጸን። እዚኦም ድማ ካብ Blc ዝመጸ QB depletion structure ይርከብዎም። viridis (PDB ID: 3PRC) (27)፣ ትች. tepidum (PDB ID: 1EYS) (28) ከምኡ’ውን Rba. sphaeroides (PDB ID: 1OGV) (29)፣ ኩሎም ዳርጋ ምስ ሓፈሻዊ ኣቃውማ QB ሓደ እዮም። ን3PRC ብቐረባ ምፍታሽ፡ ሞለኪዩላት ዲተርጀንት LDAO (Lauryl Dimethyl Amine Oxide) ኣብ መእተዊ ናይቲ QB ቦታ ይተኣሳሰሩ፡ እዚ ድማ ናብ ዕጹው ቅርጺ ዳግማይ ንኸይስርዑ ክኽልክል ከምዝኽእል ተረጋጊጹ። ዋላ እኳ LDAO ኣብ 1EYS ወይ 1OGV ኣብ ሓደ ቦታ እንተዘይበስበሰ እዞም RCs ሓደ ዓይነት ዲተርጀንት ተጠቒሞም እዮም ዝዳለዉ ስለዚ ተመሳሳሊ ውጽኢት ከስዕቡ ይኽእሉ። እቲ ክሪስታላዊ ኣቃውማ Rba. Sphaeroides RC co-crystallized with cytochrome c2 (PDB ID: 1L9B) እውን ዕጹው QB ሳይት ዘለዎ ይመስል። ይኹን እምበር፡ ኣብዚ ጉዳይ እዚ፡ እቲ N-terminal ዞባ ናይ RC-M ፖሊፔፕታይድ (ብመንገዲ H ምትእስሳር ናይቲ Tyr ተረፍ ኣብ Q helix ምስ QB መእሰሪ ቦታ ዝራኸብ) ዘይባህርያዊ ቅርጺ ይቕበል፡ እቲ QB conformational ለውጢ ድማ ብዝያዳ ኣይድህሰስን (30)። እቲ ዘረጋግእ ነገር እንተሃልዩ እዚ ዓይነት ምቕያር ቅርጺ ናይቲ M ፖሊፔፕታይድ ኣብቲ RC-LH114-W ቅርጺ ከምዘይረኣና እዩ፣ እዚ ድማ ዳርጋ ምስቲ N-terminal region ናይ RC-LH116 RC ተመሳሳሊ እዩ። ብተወሳኺ ክፍለጥ ዘለዎ ድሕሪ ምጥፋእ ናይቲ ኣብ ዲተርጀንት ዝተመርኮሰ LH1 ኣንቴና ኣብ ፒዲቢ ዝርከቡ ኣፖሊፖፕሮቲን RCs ተፈቲሖም፣ እዚ ድማ ኣብ መንጎ RCን ውሽጣዊ ገጽ ናይቲ ኣብ ከባቢኡ ዘሎ LH1 ቀለቤትን ኣብ ዘሎ ክፍተት ዝነበረ ውሽጣዊ ኲኖን ፑልን ሽኮርን ከምዘወገደ (31, 32)። RC ብዘይካ እቲ ዝበስበሰ QB quinone ንኹሎም ኮፋክተራት ስለዝዕቅብ ተግባራዊ ኮይኑ ይቕጽል፣ እዚ ድማ ውሑድ ርጉእን መብዛሕትኡ ግዜ ኣብ መስርሕ ምድላው ዝጠፍእን እዩ (33)። ብተወሳኺ፡ ምእላይ LH1ን ተፈጥሮኣዊ ዑደታዊ ሽኮርን ካብ RC ኣብ ተግባራት ጽልዋ ክህልዎ ከም ዝኽእል ይፍለጥ፡ ከም ምሕጻር ዕድመ ናይቲ ብቻርጅ ዝተፈልየ P+QB-state (31, 34, 35)። ስለዚ፡ ህላወ ናይቲ ንRC ዝኸበበ ከባብያዊ LH1 ቀለቤት፡ ነቲ “ዝተዓጽወ” QB ቦታ ክዕቅቦ ከም ዝኽእልን፡ በዚ ድማ ነቲ ኣብ ጥቓ QB ዘሎ ከባብያዊ ከባቢ ክዕቀብን ከም ዝኽእል ንግምት።
ዋላ እኳ ኣፖሊፖፕሮቲን (ብዘይ ኪዩቢ ኲኖን)ን እቲ ምሉእ ኣቃውማን ክልተ ቅጽበታዊ ስእልታት ጥራይ ናይቲ ምዝውዋር ናይቲ ኪዩቢ ሳይት ዝውክሉ እንተኾነ፡ ኣብ ክንዲ ተኸታታሊ ፍጻመታት፡ እቲ ምትእስሳር ብሃይድሮኲኖን ዳግማይ ምትእስሳር ንምክልኻል ብኣፍደገ ክግበር ከም ዝኽእል ምልክታት ኣሎ To inhibit substrate inhibition. ኣብ ጥቓ QB ሳይት ኣፖሊፖፕሮቲን ዘሎ ምትእስሳር ኲኖሎልን ኲኖንን ዝተፈላለየ ክኸውን ይኽእል እዩ፣ እዚ ድማ ብRC ናብ ምንጻግ ይገብሮ። ለውጢ ቅርጺ ቅርጺ ኣብ ምትእስሳርን ምንካይን ኲኖናት ተራ ከም ዘለዎ ካብ ነዊሕ እዋን ኣትሒዙ ይግለጽ። ድሕሪ ጸልማት ምትዕጽጻፍ ናይ ፍሮዝን RCs ኲኖን ናይ ምንካይ ዓቕሞም ይዳኸም (36)፤ ራጂ ክሪስታሎግራፊ ከም ዘመልክቶ እዚ ጉድኣት ብሰንኪ QB quinones ካብቲ ንጡፍ ፕሮክሲማል ፖዚሽን ኣስታት 4.5 Å ኣብ “ዲስታል” ኮንፎርሜሽን ተዓጽዮም ብምህላዎም እዩ (26) , 37)። እዚ ዲስታል መእሰሪ ቅርጺ ቅጽበታዊ ስእሊ ናይቲ ኣብ መንጎ ኣፖሊፖፕሮቲንን ምሉእ ቀለቤት ቅርጺን ዘሎ ማእከላይ ኩነታት ምዃኑ ንእምት፣ እዚ ድማ ነቲ ናይ መጀመርታ ምትእስሳር ምስ ኲኖንን ምኽፋት ናይቲ QB ሳይትን ዝስዕብ እዩ።
ኣብ PSII complex ናይ ዝተወሰኑ ፎቶትሮፊክ ባክተርያን ሳይኖባክተርያን፣ ኣልጌን ተኽልታትን ዝተረኽበ ዓይነት II RC መዋቕራውን ተግባራውን ዕቃበ ኣለዎ (38)። ኣብ ስእሊ 6 (D and E) ዝተርኣየ መዋቕራዊ ኣሰላልፋ ኣብ መንጎ PSII RCsን QB site ናይቲ ባክተርያዊ RC complexን ዘሎ ተመሳሳልነት ዘጉልሕ እዩ። እዚ ንጽጽር እዚ፡ ነቶም ብቐረባ ዝተኣሳሰሩ ስርዓታት ምትእስሳርን ምንካይን ኲኖን ንምጽናዕ ሞዴል ኮይኑ ጸኒሑ እዩ። ቅድሚ ሕጂ ዝተዘርግሑ ጽሑፋት፡ ለውጢ ቅርጺ (conformational changes) ብPSII ምንካይ ናይ ኲኖናት ከም ዝስነ ይሕብሩ ነይሮም (39, 40)። ስለዚ፡ ንፍልቀት ዕቃበ RC ኣብ ግምት ብምእታው፡ እዚ ቅድሚ ሕጂ ዘይተዓዘብናዮ ናይ ምትእስሳር ኣገባብ ኣብ QB ሳይት PSII RC ኣብ ኦክስጅን ዘለዎም ፎቶትሮፊክ ተኽልታት እውን ተግባራዊ ክኸውን ይኽእል።
Rps ΔpufW (unlabeled pufW deletion) ከምኡ’ውን PufW-His (C-terminal 10x His-tagged protein-W ካብ ተፈጥሮኣዊ pufW locus ዝተገልጸ) ዝበሃሉ ጽግዕተኛታት። palustris CGA009 ኣብ ዝሓለፈ ስራሕና (16) ተገሊጹ ነይሩ። እዞም ጽግዕተኛታትን እቲ ኣይሶጀኒክ ዱር-ዓይነት ወላዲን ካብ ፍሪዘር ብውሑዳት ቁጽሪ ዋህዮታት ኣብ PYE (ነፍሲ ወከፎም 5 ግ ሊትሮ -1) (ኣብ LB ኣብ -80 °C ተዓቂቡ፣ 50% ( w/v) ግሊሰሮል) ፕሮቲን፣ ማይ-በሰላ ቅብኣትን ሱክሲኔትን ዝሓዘ) ኣጋር [1.5% (w/v)] ጻሕሊ ብምስርሓብ ተረኺቦም። እቲ ጽላት ኣብ ትሕቲ ኣናሮቢክ ኩነታት ኣብ ናይ ክፍሊ ሙቐት ንሓደ ለይቲ ኣብ ጸልማት ተሓቢኡ፣ ድሕሪኡ ብOSRAM 116-W ሃሎጅን ኣምፑላት (RS Components, UK) ብዝተዋህበ ጻዕዳ ብርሃን (~50 μmolm-2 s-1) ን3 ክሳብ 5 መዓልታት ክሳብ ሓደ ኮሎኒ ዝረአ ተበርሀ። ሓደ ኮሎኒ ብ0.1% (w/v) ካሳሚኖ ኣሲድ (ካብዚ ንደሓር M22 ተባሂሉ ዝጽዋዕ) ዝተመላእ 10 ሚሊ ሊትር M22+ ማእከላይ (41) ንምኽታብ ተጠቒሙ። እቲ ባህሊ ኣብ ትሕቲ ትሑት ኩነታት ኦክስጅን ኣብ ጸልማት ኣብ 34 ዲግሪ ሰንቲግሬድ ምስ ምንቅጥቃጥ ብ180 rpm ን48 ሰዓታት ዓብዩ፣ ድሕሪኡ 70 ሚሊ ሊትር ናይቲ ባህሊ ኣብ ተመሳሳሊ ኩነታት ን24 ሰዓታት ተኸቲቡ። 1 ሚሊ ሊትር መጠን ዘለዎ ፍርቂ ኤሮቢክ ባህሊ 30 ሚሊ ሊትር M22 ማእከላይ ኣብ 30 ሚሊ ሊትር ዩኒቨርሳል ስክሩ-ቶፕ ግሉጽ ብርጭቆ ጥርሙዝ ንምኽታብን ብናይ ምልዕዓል (~50μmolm-2 s-1) ን48 ሰዓታት ብጽሩይ ማግኔታዊ ሓይሊ Stirring rod ንምውቃዕን ይጥቀመሉ። ብድሕሪኡ 30 ሚሊ ሊትር ናይቲ ባህሊ ብኣስታት 1 ሊትሮ ባህሊ ኣብ ተመሳሳሊ ኩነታት ተኸቲቡ፣ እዚ ድማ ብድሕሪኡ ኣስታት 9 ሊትሮ ባህሊ ኣብ ~200 μmolm-2 s-1 ዝተበርሀ ን72 ሰዓታት ንምኽታብ ተጠቒሙ። እቶም ዋህዮታት ብሴንትሪፉጌሽን ኣብ 7132 RCF ን30 ደቓይቕ ተዓጺዶም፡ ኣብ ~10 ሚሊ ሊትር 20 ሚሊ ሜትር ትሪስ-ኤችሲኤል (ፒኤች 8.0) ዳግማይ ተዓጽዮም፡ ክሳብ ዘድሊ ድማ ኣብ -20 ዲግሪ ሰንቲግሬድ ተዓቂቦም።
ድሕሪ ምፍሳስ ገለ ክሪስታላት ዲኦክሲራይቦኑክሊየዝ I (መርክ፡ ዓባይ ብሪጣንያ)፡ ላይሶዛይም (መርክ፡ ዓባይ ብሪጣንያ) ከምኡ’ውን ክልተ ሮቸ ሆሎኢንዛይም ፕሮቲየዝ ኢንሂቢተር ጽላት (መርክ፡ ዓባይ ብሪጣንያ) ኣብቶም ዳግማይ ዝተሰቕሉ ዋህዮታት ምውሳኽ። ኣብ 20,000 psi ዝዓቐኑ ፈረንሳዊ ጸቕጢ ዋህዮ (ኣሚንኮ፡ ኣመሪካ)፡ እቶም ዋህዮታት ካብ 8 ክሳብ 12 ግዜ ተበታቲኖም። ድሕሪ ምእላይ ዘይተሰብረ ዋህዮታትን ዘይፈስስ ፍርስራስን ብሴንትሪፉጌሽን ኣብ 18,500 RCF ን15 ደቓይቕ ኣብ 4°C ድሕሪ ምእላይ እቲ ሽፋን ካብቲ ቀለም ዘለዎ ላይዘት ብሴንትሪፉጌሽን ኣብ 113,000 RCF ን2 ሰዓታት ኣብ 43,000 ዲግሪ ሰንቲግሬድ ተረኺቡ። ነቲ ዝፈስስ ክፋል ደርብዮ እሞ ነቲ ሕብራዊ ሽፋን ኣብ 100 ክሳብ 200 ሚሊ ሊትር 20 ሚሊ ሜትር ትራይስ-ኤችሲኤል (ፒኤች 8.0) ዳግማይ ኣንጠልጢልካ ዝርአ ድምር ንብረት ክሳብ ዘይህሉ ሓደ ዓይነት ምግባር። እቲ ዝተንጠልጠለ ሽፋን ኣብ 20 mM tris-HCl (pH 8.0) (Anatrace, USA) 2% (w/v) β-DDM ዝሓዘ ን1 ሰዓት ኣብ ጸልማት ኣብ 4°C ልኡም ምንቅጥቃጥ ተሓቢኡ። ብድሕሪኡ ኣብ 70 ዲግሪ ሰንቲግሬድ ሴንትሪፉጅ ብምግባር 150,000 RCF ኣብ 4 ዲግሪ ሰንቲግሬድ ን1 ሰዓት ንምፍሳስ ተረፍ ዘይፈስስ ነገራት ንምእላይ።
እቲ ካብ ΔpufW ጽግዕተኛ ዝመጸ ምፍሳስ ሽፋን ኣብ 50 ሚሊ ሊትር DEAE Sepharose ኣዮን ምልውዋጥ ዓምዲ ምስ ሰለስተ ዓምዲ ጥራዛት (CV) ናይ መእሰሪ መከላኸሊ [20 ሚሊ ሜትር tris-HCl (pH 8.0) 0.03% (w / v) β-DDM ዝሓዘ] ተለኺዩ። ነቲ ዓምዲ ብኽልተ ሲቪ መእሰሪ መከላኸሊታት ምሕጻብ፣ ድሕሪኡ ነቲ ዓምዲ ብኽልተ 50 ሚሊ ሜትር NaCl ዝሓዙ መእሰሪ መከላኸሊታት ምሕጻብ። እቲ RC-LH116 ኮምፕለክስ ብመስመራዊ ምዕባለ ካብ 150 ክሳብ 300 ሚሊ ሜትር NaCl (ኣብ መእሰሪ መከላኸሊ) ኣብ 1.75 ሲቪ ተሓፂቡ፣ እቲ ዝተረፈ መእሰሪ ውህደት ድማ ብ300 ሚሊ ሜትር NaCl ኣብ 0.5 ሲቪ ዝሓዘ መእሰሪ መከላኸሊ ተሓፂቡ። ኣብ መንጎ 250ን 1000ን ና.ሜ ዘሎ ናይ ምምጣጥ ስፔክትረም ኣኪብካ ነቲ ካብ 1 ዝዓቢ ናይ ምምጣጥ ሬሽዮ (A880/A280) ዘለዎ ክፋል ኣብ 880 ክሳብ 280 ና.ሜ. ካብ 1.7 ንላዕሊ A880/A280 ሬሽዮ ዘለዎም ክፋላት ካብ 3.0 ንላዕሊ A880/A805 ሬሽዮ ዘለዎም ክፋላት ምቕልቃል፣ ሳልሳይ ዙርያ ምልውዋጥ ኣዮን ምፍፃም፣ ካብ 2.2 ዝለዓለ A880/A280 ሬሽዮ ዘለዎም ክፋላት ድማ ካብ 5.0 ንላዕሊ A880/A805 ሬሽዮ ዘለዎም ክፋላት ምዕቃብ። እቲ ብኸፊል ዝተጸረየ ውህደት ኣብ ኣሚኮን 100,000 ሞለኪዩላዊ ክብደት ምቑራጽ (MWCO) ሴንትሪፉጋል ፍልተር (Merck, UK) ክሳብ ~2 ሚሊ ሊትር ተዋህሊሉ፣ ኣብ 200 ሚሊ ሜትር NaCl መከላኸሊ ዝሓዘ ሱፐርዴክስ 200 16/600 ዓቐን ምግላል ዓምዲ (GE Healthcare, US) ተጻዒኑ፣ ድሕሪኡ ኣብ ተመሳሳሊ መከላኸሊ ኣብ 1.5 CV ተሓጺቡ። ናይቲ ናይ ዓቐን ምግላል ክፋል ናይ ምምጣጥ ስፔክትራታት ኣኪብካ፣ ነቲ ናይ ምምጣጥ ስፔክትራታት ምስ A880/A280 ሬሽዮታት ልዕሊ 2.4ን A880/A805 ሬሽዮታት ልዕሊ 5.8 ክሳብ 100 A880ን ኣዋህልል፣ ብቕጽበት ድማ ንክራዮ-TEM ግሪድ ምድላው ወይ ምኽዛን ተጠቐመሎም ክሳብ ዘድሊ ኣብ -80°C ምቕማጥ።
እቲ ካብ PufW-His strain ዝተረኸበ ምፍሳስ ሽፋን ኣብ 20 ሚሊ ሊትር HisPrep FF Ni-NTA Sepharose ዓምዲ (20 mM tris-HCl (pH 8.0) 200 mM NaClን 0.03% (w/w)ን ዝሓዘ) ኣብ IMAC buffer ( GE Healthcare) ተለኺዩ። v) β-DDM] ዝብል ጽሑፍ ኣሎ። እቲ ዓምዲ ብሓሙሽተ ሲቪታት IMAC buffer ተሓፂቡ፣ ድሕሪኡ ድማ ብሓሙሽተ CVs IMAC buffer 10 mM histidine ዝሓዘ ተሓፂቡ። እቲ ኮር ኮምፕለክስ ካብቲ ዓምዲ ብሓሙሽተ IMAC buffers 100 mM histidine ዝሓዙ ተሓጺቡ። እቲ RC-LH114-W complex ዝሓዘ ክፋል ኣብ Amicon 100,000 MWCO filter (Merck, UK) ዝተዓጠቐ ዝተነቓነቐ ታንኪ ክሳብ ~10 ሚሊ ሊትር ይውህለል፣ ብናይ መእሰሪ መከላኸሊ 20 ግዜ ይቕልቀል፣ ድሕሪኡ ናብ 25 ሚሊ ሊትር ይውሰኽ ኣብቲ DEAE Sepharose ዓምዲ፣ ኣርባዕተ CVs ምስቲ መከላኸሊ ዝተኣሳሰሩ ኣቐዲሞም ይጥቀሙ። ነቲ ዓምዲ ብኣርባዕተ ሲቪ መእሰሪ መከላኸሊታት ምሕጻብ፣ ድሕሪኡ ነቲ ኮምፕለክስ ኣብ ሸሞንተ ሲቪታት ብመስመራዊ ደረጃ ካብ 0 ክሳብ 100 ሚሊ ሜትር NaCl (ኣብ መእሰሪ መከላኸሊ) ምሕጻብ፣ እቶም ዝተረፉ ኣርባዕተ ሲቪ ድማ 100 ሚሊ ሜትር መእሰሪ መከላኸሊ ዝሓዙ እቶም ተረፍ መረፍ ውህደታት ኣብ ሶድየም ክሎራይድ ዝተሓጽቡ ምስቲ ካብ 2.4 ዝለዓለ A880/A280 ሬሽዮ ተደሚሮምን እቲ... ልዕሊ 4.6 ክፋላት ዝለዓለ A880/A805 ሬሽዮ ኣብ Amicon 100,000 MWCO ሴንትሪፉጋል ፍልተር ናብ ~2 ሚሊ ሊትር ተዋህሊሉ፣ ኣቐዲሙ ድማ ብ1.5 CV IMAC ተመሊኡ Buffer equilibrated Superdex 200 16/600 size exclusion column፣ ድሕሪኡ ኣብ ተመሳሳሊ መከላኸሊ ልዕሊ 1.5 CV ተሓጺቡ። ናይቶም ዓቐን-ምግላል ክፋላት ናይ ምምጣጥ ስፔክትራታት ኣኪብካ ነቲ ናይ ምምጣጥ ስፔክትራታት ምስ A880/A280 ሬሽዮታት ልዕሊ 2.1ን A880/A805 ሬሽዮታት ልዕሊ 4.6 ክሳብ 100 A880ን ምትእኽኻብ፣ እዚኦም ድማ ብቕጽበት ንፍሮዝን TEM ግሪድ ምድላው ይጥቀሙ ወይ ድማ ክሳብ ዘድሊ ኣብ -80°C ይኽዘኑ።
ትሑት ሙቐት ዘለዎ TEM ግሪድ ንምድላው Leica EM GP immersion freezer ተጠቒምና ኢና። እቲ ኮምፕለክስ ኣብ IMAC buffer ናብ A880 of 50 ተቐላቒሉ፣ ድሕሪኡ 5μl ኣብ ሓድሽ ብድምቀት ዝፈሰሰ QUANTIFOIL 1.2/1.3 ካርቦን ዝተለበጠ ነሓስ መትረብ (Agar Scientific, UK) ተጻዒኑ። ነቲ ሽቦ ኣብ 20 ዲግሪ ሰንቲግሬድን 60% ኣንጻራዊ ርስሓትን ን30 s ምሕቃቕ፣ ድሕሪኡ ን3 s ምድራዝ፣ ድሕሪኡ ኣብ ፈሳሲ ኢቴን ኣብ -176 ዲግሪ ሰንቲግሬድ ምጥፋእ።
ዳታ ናይቲ RC-LH114-W ኮምፕለክስ ኣብ eBIC (Electronic Bioimaging Center) (British Diamond Light Source) ብTitan Krios ማይክሮስኮፕ ተመዝጊቡ፣ እዚ ማይክሮስኮፕ ኣብ ምቅልጣፍ ቮልቴጅ 300kV ዝሰርሕ፣ ብስማዊ ምዕባይ 130,000×ን ጸዓት ናይ- 20 eV ክፍተት ምረጽ። ዳታ ንምእካብ ብኮምቲንግ ሞድ ምስልታት ንምምዝጋብ K2 peak detector ዘለዎ Gatan 968 GIF Quantum ተጠቒሙ። እቲ ዝተዓቀነ ፒክሰል ስፍሓት 1.048Å ኮይኑ፡ መጠን ዶዝ ድማ 3.83 e-Å-2s-1 እዩ። ነታ ፊልም ኣብ 11 ካልኢት ኣኪቡ ኣብ 40 ክፋላት መቒሉ። ነቲ ብካርቦን ዝተለበጠ ቦታ ተጠቒምካ ነቲ ማይክሮስኮፕ ዳግማይ ከተተኩሮ፣ ድሕሪኡ ኣብ ነፍሲ ወከፍ ጉድጓድ ሰለስተ ፊልምታት ኣኪብካ። ብድምር 3130 ፊልምታት ዝተኣከባ ኮይነን፡ ዲፎከስ ዋጋታት ካብ -1 ክሳብ -3μm እዩ።
ንRC-LH116 complex ዝምልከት መረዳእታ ኣብ ኣስተርበርይ ባዮስትራክቸር ላቦራቶሪ (ዩኒቨርሲቲ ሊድስ፡ ዓባይ ብሪጣንያ) ተመሳሳሊ ማይክሮስኮፕ ተጠቒምካ ዝተኣከበ እዩ። እቲ ዳታ ብናይ ምቑጻር ሞድ ብ130 k ምዕባይ ዝተኣከበ ኮይኑ፡ ዓቐን ፒክሰል ድማ ናብ 1.065 Å ብ4.6 e-Å-2s-1 ዶዝ ተዓቂኑ። እታ ፊልም ኣብ 12 ካልኢት ዝተቐድሐት ኮይና ኣብ 48 ክፋላት ተኸፋፊላ። ብድምር 3359 ፊልምታት ዝተኣከቡ ኮይኖም፡ ዲፎከስ ዋጋታት ኣብ መንጎ -1ን -3μmን እዮም።
ኩሉ መስርሕ ዳታ ኣብ ሻምብቆ ሪልዮን 3.0 እዩ ዝፍፀም (42)። ነቲ ምንቅስቓስ ጩራ ብዶዝ ሚዛን ንምእራም Motioncorr 2 (43) ተጠቐም፣ ድሕሪኡ CTFFIND 4.1 (44) ተጠቒምካ CTF (contrast transfer function) መለክዒ ምውሳን። ድሕሪ እዞም ናይ መጀመርታ ደረጃታት መስርሕ ዝረኣዩ ልሙዳት ፎቶማይክሮግራፍ ኣብ ስእሊ 2 ተገሊጾም ኣለዉ።S16. እቲ ኣውቶማቲክ ምምራጽ ቅጥዒ ኣብ 250 ፒክሰል ፍሬም ኣስታት 250 ፒክሰላት ናይ 1000 ንጥረ ነገራት ብኢድ ብምምራጽን መወከሲ ክልተ-መኣዝናዊ (2D) ምደባ ዘይብሉን ዝፍጠር ኮይኑ፡ በዚ ድማ ነቶም ንናሙና ብከላ ዘማልኡ ወይ ርኡይ ባህርያት ዘይብሎም ምደባታት ይነጽግ። ድሕሪኡ፡ ኣብ ኩሎም ማይክሮፎቶግራፍ ኣውቶማቲክ ምምራጽ ተኻይዱ፡ RC-LH114-W ድማ 849,359 ንጥረ ነገራት፡ RC-LH116 ኮምፕለክስ ድማ 476,547 ንጥረ ነገራት ነይሩ። ኩሎም ዝተመርጹ ንጥረ ነገራት ክልተ ዙርያታት ዘይ-መወከሲ 2D ምደባ ኣሕሊፎም እዮም፣ ድሕሪ ነፍሲ ወከፍ ጉያ ድማ፣ እቶም ነቲ ናይ ካርቦን ስፍሓት፣ ናሙና ብከላ፣ ዝኾነ ርኡይ ባህርያት ወይ ብጽኑዕ ዝተደራረቡ ንጥረ ነገራት ዘማልኡ ንጥረ ነገራት ይንጸጉ፣ ውጽኢቱ ድማ 772,033 (90.9%)ን 359,678 (75.5%)ን ) ንጥረ ነገራት ን3D ምደባ ይጥቀሙ RC-LH114-Wን RC-LH116ን ዝበሃሉ ምዃኖም ይፍለጥ። እቲ ናይ መጀመርታ 3D መወከሲ ሞዴል ብመገዲ ስቶካስቲክ ግራድየንት ምውራድ እዩ ተፈጢሩ። ነቲ ናይ መጀመርታ ሞዴል ከም መወከሲ ብምጥቃም፡ እቶም ዝተመርጹ ንጥረ ነገራት ብ3D ኣብ ኣርባዕተ ምድባት ይምደቡ። ኣብዚ ምድብ ዘሎ ሞዴል ከም መወከሲ ብምጥቃም ኣብቶም ኣብ ዝዓበየ ምድብ ዘለዉ ንጥረ ነገራት 3D ምጽራይ ምፍጻም፣ ድሕሪኡ ነቲ ናይ መጀመርታ 15Å ትሑት ምሕላፍ ፍልተር ተጠቒምካ ነቲ ናይ መፍትሒ ቦታ ንምሽፋን፣ 6 ፒክሰላት ልስሉስ ወሰናት ብምውሳኽ፣ ከምኡ’ውን ድሕሪ መስርሕ ነቶም ፒክሰላት ነቲ ናይ ላዕለዋይ ዲቴክተር ናይ Gatan K2 peak Modulation transfer function ንምእራም። ንRC-LH114-W ዳታሴት፡ እዚ ናይ መጀመርታ ሞዴል ኣብ ወሰናት ናይቲ ማስክ ዘሎ ሓያል ጽፍሒ (ካብቲ ኣብ UCSF Chimera ዘሎ ቀንዲ ዝተሓላለኸ ጽፍሒ ዝተቛረጸ) ብምእላይ ተቐይሩ። እቶም ውጽኢት ዝኾኑ ሞዴላት (ርዝነት RC-LH114-Wን RC-LH116ን ብቕደም ተኸተል 3.91ን 4.16 Åን እዮም) ከም መወከሲ ንኻልኣይ ዙርያ 3D ምደባ ይጥቀሙ። እቶም ዝተጠቕሙ ንጥረ ነገራት ኣብቲ ናይ መጀመርታ 3D ክፍሊ ዝተጠርነፉ ኮይኖም ምስቲ ከባቢ ድልዱል ምትእስሳር የብሎምን። ምድብላቕ ወይ ርኡይ መዋቕራዊ ባህርያት ዘይምህላው። ድሕሪ ካልኣይ ዙርያ 3D ምደባ ዝለዓለ ርዝነት ዘለዎ ምድብ ተመሪጹ [ንRC-LH114-W ሓደ ምድብ 377,703 ንጥረ ነገራት (44.5%)፣ ንRC-LH116 ክልተ ምድብ ኣለዉ፣ ብድምር 260,752 ንጥረ ነገራት (54.7%) ፣ ድሕሪ እቲ ናይ መጀመርታ ምዝዋር ብንእሽቶ ፍልልይ ምስ ዝስለፉ ጥራይ ሓደ ዓይነት ዝኾኑሉ]። እቶም ዝተመርጹ ንጥረ ነገራት ኣብ 400 ፒክሰል ሳንዱቕ ዳግማይ ተቐዲሖም ብ3D ምጽራይ ይጽረጉ። እቲ መፍትሒ ማስክ ብመጀመርታ 15Å ትሑት ምሕላፍ ፍልተር፣ 3 ፒክሰል ካርታ ምስፍሕፋሕን 3 ፒክሰል ልስሉስ ማስክን ተጠቒምካ እዩ ዝፍጠር። ንነፍሲ ወከፍ ንጥረ ነገር CTF ምጽራይ ብምጥቃም፣ ንነፍሲ ​​ወከፍ ንጥረ ነገር ምንቅስቓስ ምእራምን ካልኣይ ዙርያ ንነፍሲ ​​ወከፍ ንጥረ ነገር CTF ምጽራይን፣ ድሕሪ ነፍሲ ወከፍ ስጉምቲ 3D ምጽራይ፣ መፍትሒ ምሽፋንን ድሕረ-መስርሕን ይፍጸም፣ ነቲ ዝፍጠር ቅርጺ ዝያዳ ንምጽራይ። FSC (Fourier Shell Correlation Coefficient) cut-off value 0.143 ብምጥቃም፡ ርዝነት ናይ መወዳእታ ሞዴላት RC-LH114-Wን RC-LH116ን ብቕደም ተኸተል 2.65ን 2.80Åን እዩ። ናይቲ ናይ መወዳእታ ሞዴል FSC curve ኣብ ስእሊ 2 ተገሊጹ ኣሎ።S17.
ኩሎም ፕሮቲን መስርዕ ካብ UniProtKB: LH1-β (PufB; UniProt ID: Q6N9L5) ይወርዱ፤ LH1-α (PufA; ዩኒፕሮትኣይዲ: Q6N9L4)፤ RC-L (PufL; ዩኒፕሮት መለለዪ: O83005)፤ RC-M (PufM; ዩኒፕሮት መለለዪ: A0A4Z7)፤ RC-H (PuhA; ዩኒፕሮት መለለዪ: A0A4Z9)፤ ፕሮቲን-ደብሊው (PufW; UniProt ID: Q6N1K3)። SWISS-MODEL (45) ንናይ RC ሆሞሎጂ ሞዴል ንምህናጽ ተጠቒሙ፣ እዚ ሞዴል ፕሮቲን መስርዕ RC-L, RC-Mን RC-Hን ከምኡ’ውን ክሪስታላዊ ኣቃውማ Rba ዝሓዘ እዩ። sphaeroides RC ከም ቅጥዒ (PDB ID: 5LSE) ተጠቒሙ (46)። ነቲ ኣብ UCSF Chimera ዘሎ “fit map” መሳርሒ ተጠቒምካ ነቲ ዝፍጠር ሞዴል ምስቲ ካርታ (47) ንምትእስሳር፣ ኣቃውማ ፕሮቲን ንምምሕያሽ፣ ከምኡ’ውን ኮፋክተር [4×BChl a (ስም ተረፍ መረፍ ቤተ-መጻሕፍቲ ሞኖመር = BCL)፣ 2×BPh a (BPH)፣ ሓደ ወይ ክልተ ዓይነት UQ10 (U10)፣ ሓደ ዘይ-ሄም ሓጺን (Fe)ን ሓደ 3,4-ዳይሃይድሮሄክሳካርቦኒልኮሊንን ተጠቐም (QAK)] ንምውሳኽ ኩት (48) ይጥቀሙ። QAK ኣብ ሞኖመር ቤተ-መጻሕፍቲ ስለዘይርከብ፡ ኣብ PHENIX (49) ዝርከብ eLBOW tool ተጠቒምካ ፓራሜትር ተገይሩሉ።
ቀጺሉ ድማ ንኡስ ኣሃዱ LH1 ተሃኒጹ። ኣብ መጀመርታ ኣብ PHENIX (49) ዘሎ ኣውቶማቲክ መሳርሒ ህንጸት ነቲ ካርታን LH1-αን LH1-βን ፕሮቲን መስርዕ ከም እታው ተጠቒምካ ንገለ ክፋል ናይቲ LH1 መስርዕ ብኣውቶማቲክ ንምህናጽ ተጠቒሙ። እቲ ዝበለጸ ምሉእ LH1 ንኡስ ኣሃዱ ምረጽ፣ ኣውጺእካ ናብ ኩት ጽዓኖ፣ ብኢድካ ነቲ ዝጎደለ መስርዕ ኣብኡ ወስኸሉ፣ ቅድሚ ክልተ BCls a (BCL)ን ሓደ spirilloxanthin (CRT)ን ምውሳኽካ ድማ ብኢድካ ምሉእ ኣቃውማ ምጽራይ [ብመሰረት ዝምልከቶ Rps ጽቕጥቕጥ ናይቲ LH1 complexን ዝፍለጥ ትሕዝቶ ካሮቲኖይድን። ዓይነታት (17)]። ምሉእ ንኡስ ኣሃዱ LH1 ቅዳሕ፣ ከምኡውን UCSF Chimera “Docking Map Tool” ተጠቒምካ ኣብቲ ጎኒ ዘሎ ሞዴል ዘይኮነ ከባቢ ጽቕጥቕጥ LH1 ምዕቃብ፣ ድሕሪኡ ኣብ Coot ምጽራይ፤ ኩሎም ንኡሳን ኣሃዱታት LH1 ሞዴል ክሳብ ዝኾኑ ነቲ መስርሕ ምድጋም። ንኣቃውማ RC-LH114-W፡ ኣብ ኩት ዘይተመደበ ጽፍሒ ብምውጻእ፡ እቲ ፕሮቲን ካብቶም ኣብ ካርታ USCF Chimera ዝተረፉ ፕሮቲን ዘይኮኑ ባእታታት ይምቀል እሞ፡ መሳርሒ ኣውቶቢልድ ነቲ ናይ መጀመርታ ሞዴል ንምምስራት ይጥቀመሉ፡ እቶም ዝተረፉ ንኡሳን ኣሃዱታት ድማ (ፕሮቲን-W) ሞዴሊንግ። ኣብ ፊኒክስ (49)። ዝኾነ ዝጎደለ መስርዕ ኣብቲ ኣብ ኩት (48) ዘሎ ውጽኢት ሞዴል ወስኽ፣ ድሕሪኡ ንብምሉኡ ንኡስ ኣሃዱ ብኢድካ ምጽራይ። እቲ ዝተረፈ ዘይተመደበ ጽፍሒ ምስ ውህደት ሽኮር (PDB ሞኖመር ቤተ-መጻሕፍቲ ID ናይ CDL = CDL, POPC = 6PLን POPG = PGTን)፣ β-DDM ዲተርጀንት (LMT)ን UQ10 ሞለኪዩላት (U10) ይሰማማዕ። ስታቲስቲክስ ሞዴልን ስእላዊ ጽሬት ናይቲ ምጥዕዓምን ዝያዳ ክመሓየሽ ክሳብ ዘይክእል ምሉእ ናይ መጀመርታ ሞዴል ፍጹም ንምግባር PHENIX optimization (49) ከምኡ’ውን manual optimization ኣብ Coot (48) ተጠቐም። ኣብ መወዳእታ፡ ነቲ ከባብያዊ ካርታ ንምስላሕ LocScale (50) ተጠቐም፡ ድሕሪኡ ካልኦት ሓያሎ ዑደታት ናይ ሞዴሊንግ ናይቲ ዘይተመደበ ጽፍሒን ኣውቶማቲክን ማንዋልን ምምሕያሽን ምፍጻም።
እቶም በብወገኖም ፔፕታይድስ፣ ኮፋክተራትን ካልኦት ኣብ ውሽጢ ፅዕነትኦም ዝተዓፀዉ ሊፒዳትን ኲኖናትን ኣብ ስእሊ 1ን 2ን ተገሊፆም ኣለው።S18 ክሳብ S23። ናይቲ ናይ መወዳእታ ሞዴል ስታቲስቲካዊ ሓበሬታ ኣብ ሰሌዳ S1 ተገሊጹ ኣሎ።
ብኻልእ መንገዲ እንተዘይተገለፀ UV/Vis/NIR absorption spectra ኣብ Cary60 spectrophotometer (Agilent, USA) ኣብ 1 nm ፍልልይ ካብ 250 nm ክሳብ 1000 nmን ናይ ምውህሃድ ግዜን 0.1s ተኣኪቡ።
ነቲ ናሙና ኣብ ኳርትዝ ኩቨት ብ2 ሚ.ሜ መንገዲ ናብ A880 ናይ 1 ምቕልቃል፣ ኣብ መንጎ 400ን 1000ን ና.ሜ ድማ ናይ ምምጣጥ ስፔክትረም ምእካብ። እቶም ክቢ ዳይክሮይክ ስፔክትራታት ኣብ ጃስኮ 810 ስፔክትሮፖላሪሜተር (ጃስኮ፣ ጃፓን) ኣብ 1 ና.ሜ ፍልልይ ኣብ መንጎ 400 ና.ሜን 950 ና.ሜን ብ20 ና.ሜ ደቒቕ-1 ፍጥነት ስካን ተኣኪቦም።
ሞላር ናይ ምጥፋእ ምልክታ ነቲ ኮር ኮምፕለክስ ናብ ኣስታት 50 ዝኾነ A880 ብምፍሳስ ይውሰን።ነቲ 10μl ቮልዩም ኣብ 990μl መእሰሪ መከላኸሊ ወይ ሜታኖል ምቕልቃል፣ ንBChl ምብስባስ ንምንካይ ድማ ነቲ ናይ ምምጣጥ ስፔክትረም ብቕጽበት ምእካብ። ትሕዝቶ BChl ናይ ነፍሲ ወከፍ ናሙና ሜታኖል ብናይ ምጥፋእ ምልክት ኣብ 771 ና.ሜ ናይ 54.8 ሚሊ ሜትር-1 ሴንቲ ሜተር-1 ተሰሊዑ፣ ናይ ምጥፋእ ምልክት ድማ ተወሰነ (51)። ነቲ ዝተዓቀነ ትሕዝቶ BChl ብ 32 (RC-LH114-W) ወይ 36 (RC-LH116) ብምክፋል ናይቲ ቀንዲ ዝተሓላለኸ ምትእኽኻብ ምውሳን፣ እዚ ድማ ድሕሪኡ ኣብ መከላኸሊ ምጥፋእ ምልክት ዝተኣከበ ተመሳሳሊ ናሙና ናይ ምምጣጥ ስፔክትረም ንምፍላጥ ይጥቀመሉ። ተምዓዳዳዊ። ንነፍሲ ወከፍ ናሙና ሰለስተ ተደጋጋሚ መለክዒታት ተገይሩ፣ ማእከላይ ምምጥጣን ናይቲ BChl Qy maximum ድማ ንሕሳብ ተጠቒሙ። ኣብ 878 ና.ሜ ዝተለክዐ ናይ ምጥፋእ ምልክት RC-LH114-W 3280±140 mM-1 cm-1 ክኸውን ከሎ፣ ኣብ 880 ና.ሜ ዝተለክዐ ናይ ምጥፋእ ምልክት RC-LH116 ድማ 3800±30 mM-1 cm-1 እዩ።
UQ10 ብመሰረት ኣብ (52) ዘሎ ኣገባብ ብቑጽሪ ተገይሩሉ። ብሓፂሩ ሪቨርስ ፌዝ HPLC (RP-HPLC) ብኣጂለንት 1200 HPLC ስርዓት ተጠቒምካ እዩ ተኻይዱ። ኣስታት 0.02 ና.ሞ መፍትሒ (80:20 ሜታኖል:2-ፕሮፓኖል) ኣብ ×25 ሴንቲ ሜተር ዓምዲ። ኣብ 275 ና.ሜ (UQ10)፣ 450 ና.ሜ (ካሮቲኖይድ)ን 780 ና.ሜ (BChl)ን ን1 ሰዓት ምምጣጥ ንምክትታል ኣብ HPLC መፍትሒ isocratic elution ምግባር። ኣብ 275 ና.ሜ ክሮማቶግራም ኣብ 25.5 ደቓይቕ ዝነበረ ጫፍ ዝተዋሃሃደ ኮይኑ፡ ካልእ ክረአ ዝኽእል ውህደታት ዝሓዘ ኣይነበረን። እቲ ዝተዋሃሃደ ስፍሓት ካብ 0 ክሳብ 5.8 nmol ካብ መርፍእ ፅሩይ ደረጃታት ዝተቖፀረ ናይ ምዕቃን መስመር ብምውካስ ዝተቐድሐ ሞላር መጠን UQ10 ንምሕሳብ ይጥቀመሉ (ስእሊ S14)። ነፍሲ ወከፍ ናሙና ብሰለስተ ምድግጋም ዝተተንተነ ኮይኑ፡ እቲ ዝተጸብጸበ ጌጋ ምስ SD ናይቲ ማእከላይ ደረጃ ይሰማማዕ።
ዝለዓለ Qy ምምጣጥ 0.1 ዘለዎ RC-LH1 complex ዝሓዘ ፍታሕ ብ30 μM ዝተቐነሰ ልቢ ፈረስ ሳይቶክሮም c2 (Merck, UK)ን ካብ 0 ክሳብ 50 μMUQ2 (Merck, UK)ን ተዳልዩ። ኣብ ነፍሲ ወከፍ ትሕዝቶ UQ2 ሰለስተ 1-ml ናሙናታት ተዳልዮም ቅድሚ ምዕቃን ምስ ጸልማት ምሉእ ምትዕጽጻፍ ንምርግጋጽ ኣብ ጸልማት ኣብ 4°C ንሓደ ለይቲ ተሓቢኦም። እቲ ፍታሕ ኣብ 300 ና.ሜ ሃልሃልታ/500 መስመር ግሬቲንግ፣ 1.24 ሚ.ሜ መእተዊ፣ 0.12 ሚ.ሜ ማእኸልን 0.6 ሚ.ሜ መውፅኢ ስሊት ዝተዓጠቐ OLIS RSM1000 ሞዱላር ስፔክትሮፎቶሜተር ተፃዒኑ። ኣብ መእተዊ ናይቲ ናሙና ፎቶቱብን መወከሲ ፎቶማልቲፕላይየር ቱቦን 600 ና.ሜ ዝንውሓቱ ፓስ ፍልተር ተቐሚጡ ንናይ ምልዕዓል ብርሃን ንኸይህሉ ይግበር። እቲ ምምጥጣን ኣብ 550 ና.ሜ ብናይ ውህደት ግዜ 0.15 s ተኸታቲሉ። እቲ ናይ ምልዕዓል ብርሃን ካብቲ 880 nm M880F2 LED (Light Emitting Diode) (Thorlabs Ltd., UK) ብፋይበር ኦፕቲክ ገመድ ብ90% ጽዓት ብመንገዲ DC2200 ተቖጻጻሪ (Thorlabs Ltd., UK) ዝፍኖ ኮይኑ ናብቲ ምንጪ ብርሃን ብ90° of. እቲ መዐቀኒ ጩራ ምስቲ መስትያት ተጻራሪ ኮይኑ ዝኾነ ኣብ መጀመርታ በቲ ናሙና ዘይተወሓጠ ብርሃን ንምምላስ እዩ። ቅድሚ ብርሃን 50 s 10 s ምምጣጥ ምክትታል። ብድሕሪኡ እቲ ምምጥጣን ብዝያዳ ን60 s ኣብ ጸልማት ተኸታቲሉ፡ ኲኖሎል ብባዕሉ ንሳይቶክሮም c23 + ክሳብ ክንደይ ከም ዝንክዮ ንምግምጋም ተገይሩ (ንጥረ መረዳእታ ስእሊ S8 ርአ)።
እቲ ዳታ ኣብ ውሽጢ 0.5 ክሳብ 10 s (ከከም ምትእኽኻብ UQ2) መስመራዊ መበገሲ ፍጥነት ብምግጣምን ኣብ ነፍሲ ወከፍ ምትእኽኻብ UQ2 ደረጃታት ሰለስቲኦም ናሙናታት ብማእከላይ ገምጋምን እዩ ተሰሪሑ። እቲ በብዝምልከቶ ናይ ምጥፋእ ምልክት ዝተቖፀረ RC-LH1 ምትእኽኻብ ነቲ ፍጥነት ናብ ምልዕዓል ብቕዓት ንምቕያር ተጠቒሙ፣ ኣብ Origin Pro 2019 (OriginLab, USA) ተሰሪዑ፣ ምስ Michaelis-Menten ሞዴል ተገጢሙ ድማ ርኡይ Kmን Kcatን ክብርታት ንምውሳን ተኻኢሉ።
ንሓላፊ ምምጣጥ መለክዒታት፡ እቲ RC-LH1 ናሙና ኣብ 50 ሚሊ ሜተር ሶድየም ኣስኮርቤት (መርክ፡ ኣመሪካ)ን 0.4 ሚሊ ሜተር ተርቡቲንን (መርክ፡ ኣመሪካ) ዝሓዘ IMAC መከላኸሊ ናብ ~2μM ተቐላቒሉ። ኣስኮርቢክ ኣሲድ ከም መስዋእቲ ኤሌክትሮን ለጋሲ ይጥቀመሉ፣ tert-butaclofen ድማ ከም QB ተዓጻጻፊ ይጥቀመሉ፣ እቲ ቀንዲ ለጋሲ RC ኣብ ምሉእ መስርሕ ምዕቃን ከም ዝነከየ (ማለት ፎቶኦክሳይድ ከምዘይኮነ) ንምርግጋጽ። ኣስታት 3 ሚሊ ሊትር ናሙና ኣብ ሓደ ብሕታዊ ዝዘውር ዋህዮ (ኣስታት 0.1 ሜትር ዲያሜትር፣ 350 RPM) ምስ 2 ሚሜ ንውሓት ብርሃናዊ መንገዲ ይውሰኽ፣ እዚ ድማ እቲ ኣብ መንገዲ ሌዘር ዘሎ ናሙና ኣብ መንጎ ምልዕዓል ናህሪታት ንጸሊም ምትዕጽጻፍ እኹል ግዜ ከምዘለዎ ንምርግጋጽ እዩ። ነቲ Ti: Sapphire laser system (Spectra Physics, USA) ንምዕባይ ~100-fs laser pulses ተጠቐም ነቲ ናሙና ኣብ 880 nm ብ1 kHz (20 nJ ን NIR ወይ 100 nJ ን Vis) ናይ ምድግጋም ፍጥነት ንምልዕዓል። ቅድሚ ዳታ ምእካብና ነቲ ናሙና ንኣስታት 30 ደቓይቕ ንኣስታት 30 ደቓይቕ ንኣስታት ናይ ምልዕዓል ብርሃን ምቅላዕ። ምቅላዕ QA inactivation (ምናልባት QA ሓደ ወይ ክልተ ግዜ ምንካይ) ከስዕብ እዩ። ግን እዚ መስርሕ ንድሕሪት ዝምለስ ምዃኑ ኣስተውዕሉ ምኽንያቱ ድሕሪ ነዊሕ ናይ ጸልማት ምትዕጽጻፍ RC ቀስ ብቐስ ናብ QA ንጥፈታት ክምለስ እዩ። -10 ክሳብ 7000 ps ዝበጽሕ ናይ ምድንጓይ ግዜ ዘለዎም ሓላፊ ስፔክትራ ንምዕቃን Helios spectrometer (Ultrafast Systems, USA) ተጠቒምና ኢና። ነቶም ስብስባት ዳታ ንምፍታሕ፡ ድሕሪኡ ምውህሃድን ደረጃ ንምምዝጋብን Surface Xplorer ሶፍትዌር (Ultrafast Systems, USA) ተጠቐም። ምስ ምብስባስ ዝተኣሳሰሩ ዲፈረንሻል ስፔክትራ ንምርካብ ነቲ ዝተዋሃሃደ ዳታ ስብስብ ንምጥቃም CarpetView ሶፍትዌር ፓኬጅ (Light Conversion Ltd., Lithuania) ተጠቐም፣ ወይ ድማ ነቲ ኣብ መበቆል (OriginLab, USA) ዘሎ ንጽል-ማዕበል ስፔክትራል ፍልቀት ንምስምማዕ ንብዙሓት ኤክስፖነንት ምስቲ መሳርሒ ምላሽ ዝተሓላለኸ ፋንክሽን ተጠቐም።
ከምቲ ኣብ ላዕሊ ዝተገልጸ (53)፡ ክልቲኡ RCን ፔሪፈራል LH2ን ኣንቴና ዝጎደሎ LH1 complex ዝሓዘ ፎቶሲንተቲክ ፊልም ተዳልዩ። እቲ ሽፋን ኣብ 20 ሚሊ ሜትር ትሪስ (ፒኤች 8.0) ተቐላቒሉ ድሕሪኡ ኣብ 2 ሚ.ሜ ብርሃናዊ መንገዲ ዘለዎ ኳርትዝ ኩቨት ተጻዒኑ። 30nJ ሌዘር ናህሪ ተጠቒምካ ነቲ ናሙና ኣብ 540 ና.ሜ ብናይ ምድንጓይ ግዜ -10 ክሳብ 7000 ፒ.ኤስ. ነቲ ዳታ ሴት ከምቲ ን Rps ዝተገልጸ መስርሕ። pal sample.
እቲ ሽፋን ብሴንትሪፉጌሽን ኣብ 150,000 RCF ን2 ሰዓታት ኣብ 4 ዲግሪ ሰንቲግሬድ ተለኺዩ፣ ድሕሪኡ ኣብ 880 ና.ሜ ምምጣጡ ኣብ 20 ሚሊ ሜትር ትራይስ-ኤችሲኤል (ፒኤች 8.0)ን 200 ሚሊ ሜትር NaClን ዳግማይ ተዓጽዩ። ነቲ ሽፋን ቀስ ኢልካ ኣብ 2% (w/v) β-DDM ን1 ሰዓት ኣብ ጸልማት ኣብ 4°C ብምንቅስቓስ ምፍሳስ። እቲ ናሙና ኣብ 100 ሚሊ ሜትር ትራይኢቲላሞንየም ካርቦኔት (pH 8.0) (TEAB; Merck, UK) ክሳብ 2.5 ሚሊግራም ሚሊ ሊትር-1 (ባዮ-ራድ ትንተና) ፕሮቲን ተቐላቒሉ። ተወሳኺ መስርሕ ካብቲ ኣቐዲሙ ዝተሓትመ ኣገባብ (54) ተኻይዱ፣ ካብ ምፍሳስ 50 μg ፕሮቲን ናብ ብድምር 50 μl TEAB 1% (w/v) ሶድየም ላውሬት ዝሓዘ (Merck, UK) ጀሚሩ። ድሕሪ sonication ን60 s, ምስ 5 ሚሊ ሜትር tris (2-carboxyethyl)phosphine (Merck, ዓባይ ብሪጣንያ) ኣብ 37°C ን30 ደቓይቕ ተቐኒሱ። ንS-alkylation ነቲ ናሙና ምስ 10 mM methyl S-methylthiomethanesulfonate (Merck, UK) ምሕቃቕን ካብ 200 mM isopropanol stock solution ን10 ደቓይቕ ኣብ ናይ ክፍሊ ሙቐት ምውሳኽን። ፕሮቲዮላይቲክ ምሕቃቕ 2 μg ትሪፕሲን/ኢንዶፕሮቲነዝ Lys-C ምትሕውዋስ (Promega UK) ብምውሳኽ ኣብ 37°C ን3 ሰዓታት ተሓቢኡ ተኻይዱ። እቲ ላውሬት ሰርፋክታንት 50 μl ኤቲል ኣሴቴትን 10 μl 10% (v/v) LC grade trifluoroacetic acid (TFA; Thermo Fisher Scientific, UK) ብምውሳኽን ን60 s ብቮርቴክስ ብምግባርን ተቐዲሑ። እቲ ምፍላይ ምዕራፍ ብሴንትሪፉጌሽን ኣብ 15,700 RCF ን5 ደቓይቕ ተደፋፊኡ። ብመሰረት ፕሮቶኮል ናይቲ ኣፍራዪ፡ ነቲ ፔፕታይድ ዝሓዘ ታሕተዋይ ምዕራፍ ብጥንቃቐ ንምስፋሕን ጨው ንምእላይን C18 ስፒን ኮሎምን (Thermo Fisher Scientific, UK) ተጠቒሙ። ብቫክዩም ሴንትሪፉጌሽን ድሕሪ ምንቃጽ፡ እቲ ናሙና ኣብ 0.5% TFAን 3% ኣሲቶኒትራይልን ፈሲሱ፡ 500 ng ድማ ብናኖፍሎው RP ክሮማቶግራፊ ተደሚሩ ምስ ማስ ስፔክትሮሜትሪ ተተሓሒዙ፡ ኣቐዲሙ ብዝርዝር ዝተገልጸ ናይ ስርዓት መለክዒታት ተጠቒሙ ተተንቲኑ።
ንፕሮቲን ምልላይን ብዝሕን ንRps ንምድላይ MaxQuant v.1.5.3.30 (56) ተጠቐም። ፓሉስትሪስ ፕሮቲዮም ዳታቤዝ (www.uniprot.org/proteomes/UP000001426)። እቲ ናይ ማስ ስፔክትሮሜትሪ ፕሮቲዮሚክስ ዳታ ብመንገዲ PRIDE partner repository (http://proteomecentral.proteomexchange.org) ኣብ ትሕቲ dataset identifier PXD020402 ኣብ ProteomeXchange Alliance ተቐሚጡ ኣሎ።
ንትንተና ብRPLC ምስ ኤሌክትሮስፕራይ ኣዮናይዘሽን ማስ ስፔክትሮሜትሪ ተደሚሩ፡ እቲ RC-LH1 ኮምፕለክስ ካብ ዱር-ዓይነት Rps ተዳልዩ። ኣቐዲሙ ዝተሓትመ ኣገባብ (16) ብምጥቃም፡ ኣብ ዋህዮታት ፓሉስትሪስ ዝተፈጥረ ትሕዝቶ ፕሮቲን 2 ሚሊግራም ሚሊ ሊትር-1 ኣብ 20 ሚሊ ሜትር ሄፐስ (ፒኤች 7.8)፡ 100 ሚሊ ሜትር NaClን 0.03% (w/v) β- (Bio-Rad analysis) ) DDMን እዩ ነይሩ። ብመሰረት ፕሮቶኮል ኣፍራዪ 2D purification kit (GE Healthcare, USA) ብምጥቃም 10 μg ፕሮቲን ብመገዲ ምዝናብ ምውጻእ፣ ነቲ ዝረገፈ ድማ ኣብ 20 μl 60% (v / v) ፎርሚክ ኣሲድ (FA)፣ 20% (v / v) ኣሲቶኒትራይልን 20% (v/v) ማይን ምፍሳስ። ሓሙሽተ ማይክሮሊተር ብRPLC (Dionex RSLC) ምስ ማስ ስፔክትሮሜትሪ (Maxis UHR-TOF, Bruker) ተደሚሩ ተተንቲኑ። ኣብ 60°Cን 100μlmin -1ን ንምፍላይ MabPac 1.2×100 mm ዓምዲ (Thermo Fisher Scientific, UK) ምጥቃም፣ ምስ 85% (v / v) መፍትሒ A [0.1% (v / v) FAን 0.02% (V/v) TFA ማይ ፍታሕ] ክሳብ 85%(v/v) መፍትሒ B ዝበጽሕ ምዕባለ [0.1%(v/v) FAን 0.02%(v/v)ን ኣብ 90%(v/v) ኣሲቶኒትራይል TFA] ንልዕሊ 60 ደቓይቕ ስታንዳርድ ኤሌክትሮስፕራይ ኣዮናይዜሽን ምንጪን ነባሪ መለክዒታትን ብምጥቃም፡ እቲ ማስ ስፔክትሮሜተር ካብ 100 ክሳብ 2750 m/z (ማስ-ቱ-ቻርጅ ሬሽዮ) ይረክብ። ብሓገዝ ናይቲ ExPASy bioinformatics resource portal FindPept tool (https://web.expasy.org/findpept/)፡ ነቲ ጅምላዊ ስፔክትረም ናብ ንኡሳን ኣሃዱታት ናይቲ ኮምፕለክስ ኣብ ካርታ ኣስፍሮ።
እቶም ዋህዮታት ኣብ ትሕቲ 100 ሚሊ ሊትር NF-ትሑት (10μMm-2 s-1)፣ ማእኸላይ (30μMm-2 s-1) ወይ ልዑል (300μMm-2 s-1) ብርሃን ን72 ሰዓታት ዓብዮም እዮም። M22 medium (M22 medium ኣብኡ ኣሞንየም ሳልፌት ተገዲፉ ሶድየም ሱክሲኔት ብሶድየም ኣሴቴት ዝትካእ) ኣብ 100 ሚሊ ሊትር ስክሪው-ቶፕ ጥርሙዝ (23)። ኣብ ሓሙሽተ 30-s ዑደታት 0.1 ማይክሮን ብርጭቆ ምልክት ብ1:1 ሬሽዮ ድምጺ ንዋህዮታት ንምቕያር ምልክት ተገይሩሎምን ኣብ በረድ ን5 ደቓይቕ ኣዝሒሎምን። እቲ ዘይፈስስ ነገር፣ ዘይተሰብረ ዋህዮታትን ብርጭቆ ምልክትን ብሴንትሪፉጌሽን ኣብ 16,000 RCF ን10 ደቓይቕ ኣብ ቤንችቶፕ ማይክሮሴንትሪፉጅ ተኣልዩ። እቲ ሽፋን ኣብ Ti 70.1 ሮተር ምስ 100,000 RCF ኣብ 20 mM tris-HCl (pH 8.0) ምስ 40/15% (w/w) sucrose gradient ን10 ሰዓታት ተፈላልዩ።
ከምቲ ኣብ ዝሓለፈ ስራሕና ዝተገልጸ፡ immunodetection of the His tag on PufW (16)። ብሓጺሩ፡ እቲ ዝተጸረየ ኮር ኮምፕለክስ (11.8 nM) ወይ ተመሳሳሊ ትሕዝቶ RC ዝሓዘ ሽፋን (ብኦክሳይድ ዝውሰን ነቲ ዝተቐነሰ ፍልልይ ስፔክትረም ብምጉዳልን ኣብቲ ዝተለኽየ ጀል ዘሎ ጽዕነት ብምትእስሳርን) ኣብ 2x SDS loading buffer (Merck, UK) ክልተ ግዜ ተቐላቒሉ። እቶም ፕሮቲናት ኣብ ቅዳሕ 12% bis-tris NuPage gel (Thermo Fisher Scientific, UK) ተፈላልዮም እዮም። ሓደ ጀል ብኩማሲ ብሪልያንት ብሉ (ባዮ-ራድ፡ ዓባይ ብሪጣንያ) ተለኺዩ ነቲ RC-L ንኡስ ኣሃዱ ንምጽዓንን ንምስኣልን ተገይሩ። ኣብ ካልኣይ ጀል ዝነበረ ፕሮቲን ንኢሚኖኣሳይ ናብ ሜታኖል-ኣክቲቬትድ ፖሊቪኒሊደን ፍሎራይድ (PVDF) ሽፋን (ተርሞ ፊሸር ሳይንቲፊክ፡ ዓባይ ብሪጣንያ) ተሰጋጊሩ። እቲ PVDF ሽፋን ኣብ 50 mM tris-HCl (pH 7.6)፣ 150 mM NaCl፣ 0.2% (v / v) Tween-20ን 5% (w / v) ስኪምድ ጸባ ፓውደር ተዓጽዩ፣ ድሕሪኡ ምስቲ ጸረ-His ቀዳማይ ጸረ-ኣካል (in Dilute the antibody buffer [50 mM tris-HCl (pH 7.6)) ተሓቢኡ። 150 ሚሊ ሜትር NaClን 0.05% (v/v) Tween-20]ን ኣብ 1:1000 A190-114A, Bethyl Laboratories, USA) ን4 ሰዓታት። ድሕሪ ምሕጻብ 3 ግዜ ን5 ደቓይቕ ኣብ ጸረ-ኣካል መከላኸሊ፡ እቲ ሽፋን ምስ ሆርሰራዲሽ ፐሮክሳይድ (ሲግማ-ኣልድሪች፡ ዓባይ ብሪጣንያ) ጸረ-ኣንጭዋ ካልኣዊ ጸረ-ኣካል (1:10,000 ኣብ ጸረ-ኣካል መከላኸሊ ዝተቐልቀለ) ተደሚሩ፡ ንምፍላጥ ንኽፍቀድ (ድሕሪ 3 ደቓይቕ ኣብ ጸረ-ኣካል መከላኸሊ) WESTAR ETA C 2.0 chemiluminescence substrate ተጠቒምካ ምሕቃቕ (ሳይናጀን፡ ኢጣልያ) ከምኡ’ውን ኣመርሻም ኢሜጀር 600 (ጂኢ ሄልዝኬር፡ ዓባይ ብሪጣንያ)።
ናይ ነፍሲ ወከፍ ዝተለኽየ ጀል ወይ ኢሙኖኣሳይ መስመር ዝርገሐ ጽዓት ብምስኣል፣ ኣብ ትሕቲ ጫፍ ዘሎ ከባቢ ብምውህሃድን ንጽዓት ሬሽዮ RC-L (ዝለኸየ ጀል)ን ፕሮቲን-W (ኢሙኖኣሳይ)ን ብምሕሳብን፣ ኣብ ImageJ (57) ነቲ ምስሊ መስርሕ። እዞም ሬሽዮታት ኣብቲ ጽሩይ RC-LH114-W ናሙና ሬሽዮ RC-L ምስ ፕሮቲን-W 1:1 እዩ ኢልካ ብምግማትን ብኡ መሰረት ድማ ንብምሉኡ ስብስብ መረዳእታ ንቡር ብምግባርን ናብ ሞላር ሬሽዮታት ተቐይሮም እዮም።
ነዚ ጽሑፍ ዝኸውን ተወሳኺ ጽሑፋት ንምርካብ፡ በጃኹም http://advances.sciencemag.org/cgi/content/full/7/3/eabe2631/DC1 ተወከሱ
እዚ ብመሰረት ውዕል ፍቓድ ምምስሳል ክሪኤቲቭ ኮመንስ ዝተዘርግሐ ክፉት መእተዊ ጽሑፍ እዩ። እቲ ጽሑፍ፡ እቲ መበቆላዊ ስራሕ ብግቡእ ተጠቒሱ ብዝብል ቅድመ ኩነት፡ ኣብ ዝኾነ ማዕከን ዜና ብዘይ ገደብ ምጥቃም፡ ምዝርጋሕን ምብዛሕን የፍቅድ።
መተሓሳሰቢ፡ እቲ ናብቲ ገጽ ዝመኽርካዮ ሰብ ነቲ ኢመይል ክርእዮ ከም እትደልዮን ስፓም ከም ዘይኮነን ምእንቲ ክፈልጥ ጥራይ ኢና ኢመይልካ ክትህብ ንሓትት። ዝኾነ ናይ ኢመይል ኣድራሻ ኣይንሕዝን ኢና።
እዚ ሕቶ እዚ በጻሒ ምዃንካ ንምፍታንን ኣውቶማቲክ ስፓም ምቕራብ ንምክልኻልን ዝውዕል እዩ።
ዴቪድ ጀይ ኬ ስዋይንስበርይ፡ ፓርክ ኪያን፡ ፊሊፕ ጀይ ጃክሰን፡ ኬትሊን ኤም ፋሪስ፡ ዳርዩዝ ኤም ኒድዝዊድዝኪ፡ ኤልሳቤጥ ሲ ማርቲን፡ ዴቪድ ኤ ፋርመር፡ ሎርና ኤ ማሎን፡ ረበካ ኤፍ ቶምፕሰን፡ ኒል ኤ ራንሰን፡ ዳኒኤል ፒ ካኒፍ ፡ ማርክ ጀይ ዲክማን፡ ደዊ ሆልተን፡ ክርስቲን ኪርማይር፡ ኣንድሪው ሂችኮክ፡ ሲ ኒል ሃንተር
ኣብቲ ማእከል ግብረ መልሲ ዝርከብ ልዑል ርዝነት ዘለዎ ኣቃውማ ናይቲ መጻወድያ ብርሃን 1 ኮምፕለክስ ኣብ ዳይናሚክስ ኲኖን ሓድሽ ርድኢት ይህብ።
ዴቪድ ጀይ ኬ ስዋይንስበርይ፡ ፓርክ ኪያን፡ ፊሊፕ ጀይ ጃክሰን፡ ኬትሊን ኤም ፋሪስ፡ ዳርዩዝ ኤም ኒድዝዊድዝኪ፡ ኤልሳቤጥ ሲ ማርቲን፡ ዴቪድ ኤ ፋርመር፡ ሎርና ኤ ማሎን፡ ረበካ ኤፍ ቶምፕሰን፡ ኒል ኤ ራንሰን፡ ዳኒኤል ፒ ካኒፍ ፡ ማርክ ጀይ ዲክማን፡ ደዊ ሆልተን፡ ክርስቲን ኪርማይር፡ ኣንድሪው ሂችኮክ፡ ሲ ኒል ሃንተር
ኣብቲ ማእከል ግብረ መልሲ ዝርከብ ልዑል ርዝነት ዘለዎ ኣቃውማ ናይቲ መጻወድያ ብርሃን 1 ኮምፕለክስ ኣብ ዳይናሚክስ ኲኖን ሓድሽ ርድኢት ይህብ።
©2021 ማሕበር ምዕባለ ሳይንስ ኣሜሪካ። ኩሉ መሰላት ዝተሓለወ እዩ። AAAS መሻርኽቲ ናይ HINARI, AGORA, OARE, CHORUS, CLOCKSS, CrossRef ከምኡ ውን COUNTER እዩ። ሳይንስኣድቫንስ ISSN 2375-2548።